Копиране на подобни на такса рецептори и туморогенеза. Тол-подобни рецептори – инструмент за разпознаване на микробни агенти от клетки на вроден неспецифичен имунитет Ендоцитозни, сигнални и разтворими рецептори на вроден имунитет

Вече споменатите Toll рецептори са открити в съвсем различен, неимунологичен контекст, в края на 80-те години.

Първият протеин от това семейство е характеризиран в лабораторията на C. Ntisslcin-Volhard по време на скрининг за мутации в гени, участващи в регулацията на дорсовентралния компонент на ембриогенезата (10). Бяха открити няколко гена, чиито продукти принадлежат към един и същ сигнален път и една от мутациите доведе до факта, че ларвите на Drosophila нямат ясно изразена коремна или задна страна, целият ембрион се състои само от гръб. Този мутант е кръстен “Toll”, което на немски означава “удивителен, необикновен”, именно заради необичайния фенотип. Според традицията на генетиците генът е получил същото име. Интересно е, че за набор от произведения, които откриват повечето от генетичните пътища, участващи в ранното ембрионално развитие на Drosophila (включително Toll), Нобеловата награда е присъдена през 1995 г. - буквално в навечерието на откриването на ролята на този ген във вродения имунитет. Може би Toll е най-„нобеловият” ген в историята на науката.

И така, генът Toll кодира протеин, състоящ се от три домена, единият от които е трансмембранен. Екстрацелуларният домен съдържа около 30 повторения с фиксирано разстояние между запазени левцини, наречени богати на левцин региони (LRRs), и те се намират в много протеини, свързани с имунния отговор в различни организми. Функцията на вътреклетъчния домен първоначално беше неясна, но постепенно стана ясно, че той ще сигнализира за активирането на транскрипционни фактори, които са роднини на мухи на NFkB. Както при хора, така и при мишки, NFkB е семейство от изключително важни транскрипционни фактори, които участват в индуцирането на много гени, участващи във възпалителния и имунен отговор. Както вече споменахме, основен компонент на защитния отговор при мухите е индуцирането на антимикробни пептиди, които се свързват с клетъчните стени на бактерии или гъбички и ги убиват. Когато гените, кодиращи тези антимикробни пептиди, бяха клонирани в началото на 1990 г., беше открито, че техните промотори съдържат ДНК последователности, съответстващи на NFKB-свързващи региони. Това показва, че гените, които се индуцират по време на защитен имунен отговор чрез сигналния път на Toll, се регулират транскрипционно от NFkB. Оставаше да се тества дали тези защитни пептиди ще бъдат произведени в Toll мутантни мухи (оригиналната Toll мутация не беше подходяща, тъй като беше смъртоносна!) и какво щеше да се случи, ако те бяха заразени с бактерии или гъбички. Както беше отбелязано във въведението, именно този „Нобелов“ експеримент беше извършен в лабораторията на Й. Хофман в Страсбург от Б. Леметр. Оказа се, че мутантните мухи бързо умират в отговор на гъбични инфекции именно защото в тях не се синтезират противогъбични пептиди, които обикновено се индуцират бързо в отговор на инфекция. Интересното е, че отговорът на някои бактериални патогени при тези мухи е напълно нормален, което предполага, че мутацията е нарушила само един клон на вродения имунен отговор.

Както вече беше отбелязано, след кратко време рецептори, подобни на Toll, бяха клонирани при бозайници - при хора и мишки. Те се наричат ​​TLRs - Toll-like рецептори (или Toll-like рецептори). По-късно беше открито, че има 10-12 такива рецептори при бозайниците и броят на функционалните рецептори варира при различните видове, което показва скорошни еволюционни промени.

Миши и човешки TLR също индуцират сигнален път, който води до активиране на NFkB, което задейства експресията на различни ефекторни гени, включително гени за възпалителни цитокини и така наречените костимулиращи молекули.

Ако намерите грешка, моля, маркирайте част от текста и щракнете Ctrl+Enter.

Оцеляването на животните в среда, пълна с потенциално патогенни микроорганизми, е възможно, ако те притежават набор от механизми за незабавно разпознаване и елиминиране на микробите, формиращи еволюционно древна форма на имунитет, наречен вроден (първоначален, конституционален, естествен).

Важна роля в развитието на вродения имунитет играе системата за откриване (разпознаване, разпознаване) на чужди молекули и техните носители. Значително постижение от последното десетилетие в тази област на изследване са данните за естеството и естеството на взаимодействието с патогенно-асоциирани молекулярни модели на група рецептори, известни като Toll рецептори в Drosophila melanogaster и Toll-подобни рецептори при хора и мишки. Подобно екзотично наименование на разглежданата група рецептори дава известният немски изследовател, носител на Нобелова награда за физиология и медицина за 1996 г., Нюслен-Фолхард. „Toll“ се превежда от немски като „невероятно“ или „умопомрачително“. Точно така Нюслен-Фолхард реагира на снимката на анормално ембрионално развитие на Drosophila melanogaster, която й показаха служителите на лабораторията. Тази група изследователи анализира експресията на набор от гени по време на ембриогенезата и тяхното значение за формирането на органи и тъкани на насекоми (Anderson, 2000). Те широко използват методи на молекулярна биология в работата си за включване и изключване на гени, свързани с морфогенезата. Те, по-специално, идентифицираха критичното значение на рецепторите при формирането на дорсовентралната ос на тялото на Drosophila, която получи името „Toll рецептори“. Друга група учени вече са установили, че рецепторите при възрастни насекоми (imagos), които са толкова важни за морфогенезата през ембрионалния период, са пряко свързани с формирането на разузнавателни механизми на вродения имунитет (Lemaitre et al., 1996). Както се оказа по-нататък, взаимодействието на компонентите на микробните мембрани (липополизахариди, пептидогликани, липотейхоеви киселини, глипротеини на микобактерии, манани на нисши гъби) с клетки, които носят Toll рецептори, инициира в тях процесите на синтез на антимикробни пептиди и протеини, които участват в унищожаването на бактерии и нисши гъби (Hoffmann et al., 1999). В този случай някои рецептори реагират на липополизахариди, други - на компоненти на клетъчната стена на нисши гъбички, трети - на пептидогликани и т.н. Такава селективност на отговора към патогенните лиганди (патоген-асоциирани молекулярни модели - според: Janeway, 1992 г. ) на рецепторите на имунните клетки на тялото определя насочването и ефективността на имунния отговор на животните към инфекция. През последните години бяха идентифицирани Toll-подобни рецептори, които участват в разграничаването на ДНК от бактериален и животински произход, въз основа на откриването на степента на метилиране на цитозин в CpG-napax, която е почти с порядък по-висока в еукариотните ДНК (Адерем и Хюм, 2000 г.). Това семейство от рецептори допълва групата от рецептори, свързани с лектини и формилметионил пептиди, които заедно осигуряват ефективно разпознаване на „не-себе“ от вродената имунна система както при безгръбначни, така и при гръбначни (Таблица 1).

Група от Toll-подобни рецептори при бозайници (човек, мишка) е представена както на повърхността (TPR2, TPR4, TPR5, TPR6), така и във вакуоларния апарат (TPR2, TPR7, TPR8, TPR9) на клетките, свързани със защитата на тялото реакции. Toll-подобните рецептори при гръбначните животни се експресират върху клетки на мононуклеарната фагоцитна система, дендритни клетки, неутрофили, базофили и мастоцити, еозинофили, NK клетки и епителни клетки (Janeway, Medzhitov, 2002), а при насекомите - върху клетки на мастната тъкан. тяло (функционален аналог на чернодробните гръбначни) и амебоцити (Hoffmann et al., 2003).

Гени и съответни протеини, принадлежащи към фамилията Toll-подобни рецептори, също са идентифицирани в човешки клетки (Medzhitov et al., 1997). Понастоящем са известни десет изоформи на TPR при хора и 12 при мишки (Rock et al., 1998; Beutler, 2004). За много от тях са установени лиганди, както и молекулярни компоненти на пътища на сигнална трансдукция, водещи до активиране на транскрипционни фактори, които са отговорни за регулирането на определен набор от гени за имунен отговор при животни. При хора и мишки са описани четири адапторни протеина, които взаимодействат с TIR домейните на TPR: MyD88—фактор на миелоидна диференциация 88; MAL/TIRAP-MyD88-подобен на адаптер/TIR-свързан протеин; TR1F - Toll-рецептор-свързан активатор на интерферон и TRAM-Toll-рецептор-свързана молекула. Тези адаптерни протеини осигуряват предаването на сигнали от TPR, 1L1R, IL18R, поради хомофилно взаимодействие с TIR домените на рецепторите, от една страна, и смъртните домейни на серин-треонин протеин кинази (IRAK, TVK1) от друга (фиг. 6, 7). Благодарение на тези протеини се образуват протеин-протеинови контакти в проксималните части на пътищата на сигнална трансдукция, които кулминират в активирането на съответните транскрипционни фактори (NFkB, IRF3), преместващи се от цитоплазмата към ядрото и взаимодействащи със специфични места в област на промотори и усилватели на гени за имунен отговор.

Клетките на човешката имунна система експресират в различни комбинации до десет различни Toll-подобни рецептори, всеки от които участва в разпознаването на един или група молекулни модели, свързани с патогена. Към днешна дата най-голямото внимание на изследователите е привлечено от TPR2 и TPR4. Последният рецептор е пряко свързан с разпознаването на липополизахарид (ендотоксин) на грам-отрицателни бактерии, тъй като генетичното нокаутиране на неговия ген (lps) води до загуба на „чувствителността“ на тялото към това съединение (Poltorak et al., 1998) . Мишки с нокаутиран lps ген са устойчиви на септичен шок, причинен от липополизахариди, но са чувствителни към инфекции с грам-отрицателна етиология.

TPR2 е отговорен за разпознаването на липопротеини от микобактериален произход (Brightbill et al., 1999; Aliprantis et al., 1999). Същият рецептор, в сътрудничество с TPR6, разпознава пептидогликани на бактериални стени (Ozinsky et al., 2000). Друга система за откриване на чужди молекули се медиира от TPR9 (Hemmi et al., 2000). Този рецептор е свързан със способността за разпознаване на неметилирани цитозинови остатъци в CpG двойки на ДНК от микробен и вирусен произход (Aderem и Hume, 2000; Aderem и Ulevith, 2000).

Първите рецептори от това семейство са идентифицирани в Drosophila по време на анализа на пътищата на сигнална трансдукция, които контролират образуването на дорсовентралната ос на ембриона на плодовата муха (Anderson et al., 1985; Hashimoto et al., 1988). Toll гените са отговорни за синтеза на трансмембранни протеини с голям извънклетъчен домен, включително множество повторения, обогатени с аминокиселината левцин (фиг. 7). По време на ембриогенезата въпросните протеини участват в междуклетъчните взаимодействия, отговорни за морфогенетичните процеси, а при зряла възрастна муха те медиират индуцируеми

отговорите на имунната система на насекомите (Lemaitre et al., 1996). Протеини, хомоложни на Toll рецепторите на плодовата муха, скоро бяха открити при хора (Medzhitov et al., 1997) и мишки (Poltorak et al., 1998). Поради структурната хомология между протеини на бозайници и Toll рецепторни протеини на плодова муха, първите бяха наречени Toll-подобни рецептори. Функционално се оказа, че тези протеини са свързани с приемането на свързани с патогена молекулярни модели от клетките на имунната система на бозайниците. Понастоящем са идентифицирани десет изоформи на Toll-подобни рецептори при хора, всяка от които, самостоятелно или в комбинация с други, селективно открива един или група от молекулярни модели. Както беше обсъдено в предишния раздел, беше установено, че Toll-подобен рецептор 4 е отговорен за свързването на липополизахариди от Грам-отрицателни бактерии към липид А. И дали...

въртенето се извършва от извънклетъчния богат на левцин домен на рецептора заедно със супрамолекуларния комплекс липополизахарид-свързващ протеин/CD 14/MD-2 протеин (фиг. 6, 7). Образуването на многокомпонентен комплекс осигурява оптимално свързване на ендотоксина с TPR4 и иницииране на пътя на сигналната трансдукция, водещ до активиране на транскрипционния фактор NFkB (Belvin and Anderson, 1996). Последният се свързва със специфични места на промотори и подобрители на повече от 150 гена, отговорни за синтеза на протеини и пептиди, участващи в различна степен в имунния отговор на организма към инфекция (Ghosh et al., 1998; Zhang and Ghosh, 2001). Пътят на сигнална трансдукция, иницииран от свързване на лиганд към TPR4, е показан на фиг. 6 и 7. Същата диаграма отразява един от пътищата на активиране на транскрипционните фактори на Drosophila, хомоложни по структура на фактора NFkB (Dif/Relish), които участват в имунния отговор на насекомото към патогени с гъбична и бактериална етиология. Изненадващото сходство на редица ключови компоненти на сравняваните пътища на сигнална трансдукция при животни, разделени в еволюцията от няколкостотин милиона години, е поразително (Hoffmann et al., 1999).

Сред съединенията, чийто синтез на генетично ниво се активира от транскрипционния протеин NFkB, са следните цитокини: IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, TNFa, LTa, LTr, GM-CSF, IL-8 ; адхезионни фактори ICAM, VCAM, ELAM; костимулиращи молекули CD40, CD80 и CD86; дефензини, произведени от епител (TAP, hpD2, mPD2). Много от тези протеини и пептиди в една или друга степен участват не само в осъществяването на вродения имунен отговор, но и регулират редица придобити имунни реакции при гръбначните животни (Janeway, 1992; Fearon and Locksley, 1996). Някои аспекти на взаимодействието между механизмите на вродения и придобития имунитет ще бъдат обсъдени в гл. 4.

Отличителна черта на вродената имунна система е нейната способност да разпознава широк спектър от микроорганизми, използвайки ограничен набор от рецептори. Структурата на някои от тях се характеризира с удивително постоянство (инвариантност) в продължение на стотици милиони години еволюция на животните. Най-показателният пример за консерватизма на структурата на някои вродени имунни рецептори са Toll рецепторите на плодовата муха Drosophila melanogaster (Hoffmann et al., 1999; Lemaitre, 2004) и хомоложните Toll-подобни рецептори на хора и мишки (Akira и Хемми, 2003). Обяснението за установеното структурно сходство на рецепторите се крие, очевидно, във факта, че техните лиганди също са структурни компоненти на микроорганизми, които се променят малко в еволюцията, наречени патоген-свързани молекулярни модели (PAMP) (Janeway, 1989, 1992, 2002) . По своята химична природа PAMP принадлежат към липиди (липид А на грам-отрицателни бактерии), въглехидрати (манани, крайно локализирани остатъци от D-маноза, L-фукоза, D-N-ацетилглюкозамин, D-глюкоза), пептиди (формилметионил пептиди на начална последователност от синтезирани бактериални протеини, флагелин на бактериални камшичета), ДНК (цитозин-неметилирани CpG ДНК тандеми на бактерии и вируси), РНК (двуверижни и едноверижни РНК вируси), хетеросъединения (пептидогликани, липотеихови съединения, липоарабиноманан, липопротеини ). Повечето от тези съединения се характеризират с присъствието си предимно в света на микробите и следователно тяхното откриване в еволюцията се основава на сложна система от вродени имунни рецептори, така наречените рецептори за разпознаване на образи (молекули) - PRR(M) ( Джейнуей, 1989). Рецепторите за разпознаване на образи, независимо или в сътрудничество помежду си и системата на комплемента, ясно разграничават (разграничават) патогенните (инфекциозни) „не-собствени” от неинфекциозни „себе си”. Благодарение на това се разгръщат допълнително ефекторни механизми на имунитета (фагоцитоза, активиране на системата на комплемента, синтез на цитокини и антибиотични пептиди и др.), Насочени към носителя на PAMP и водещи до елиминиране на патогени и техните молекули. Между изоформите на Toll рецепторите при насекомите и Toll-подобните рецептори при бозайниците има специализация в преференциалното свързване или отговор към един или друг молекулярен модел, свързан с патоген. Вече при Drosophila, Toll рецепторът (TR) реагира на инфекция от гъби (Lemaitre et al., 1996), а неговият хомоложен 18 Weeler рецептор реагира на бактериална инфекция (Imler и Hoffmann, 2000).

Представители на това рецепторно суперсемейство при хора са открити в лабораторията на C. Janeway през 1997 г. (Medzhitov et al., 1997), а в лабораторията на B. Beutler, миши TPR4, отговорен за реакцията на клетките на имунната система към ендотоксини, е проучен за първи път (Poltorak et al., 1998; Quershi et al., 1999). Установено е, че всяка изоформа на миши и човешки Toll-подобни рецептори е отговорна за откриването на един тип или група структурно подобни лиганди. TPR2 (Takeuchi et al., 1999) в сътрудничество с TPR6 (Ozinsky et al., 2000) се оказа отговорен за откриването на пептидогликани. Флагелинът, протеин от бактериални флагели, се открива от TPR5 (Hayashi et al., 2001), а бактериалната ДНК се открива от TPR9 (Hemmi et al., 2000), TPR4 директно лигира липополизахаридите, а TPR3 открива двойноверижна РНК на вируси (Alexopoulou et al., 2001). Спектърът на PAMPs за TPR2 очевидно е по-разнообразен: пептидогликани и липопротеини на бактерии, липоарабиноманани на микобактерии и манани от дрожди. Има доказателства, че предпочитанията към един или друг от лигандите се формират по време на свързването на TPR2 с други TPR. Това е доказано в случай на откриване на пептидогликани от група TPR2 и TPR6 рецептори (Schwander et al., 1999; Iyshimura et al., 1999). Сега е доказано, че хетероложната (както в случая на TPR2 и TPR6) или хомоложната (в случая на TPR3, TPR4, TPR9 и т.н.) димеризация на Toll-подобни рецептори е необходимо условие за започване на сигналната трансдукция път в резултат на свързването на свързани с патогена молекулярни модели (Beutler, 2004). При хора и мишки липополизахаридите взаимодействат директно с Toll-подобни рецептори, като са локализирани към тях под формата на двоен (JiriC/CD14) или троен (LPS/LSB/SBM) комплекс (Beutler, 2004). Трябва да се отбележи, че в случая на TPR4 са възможни най-малко два пътя на сигнална трансдукция, водещи до активиране на различни фактори за иницииране на транскрипция и, като следствие, до леко различни спектри на синтезирани цитокини (фиг. 8). Основният път, който по-рано разгледахме във връзка с активирането на транскрипционния фактор NFkB, в неговата проксимална вътреклетъчна част е свързан с хетеродимерен комплекс, състоящ се от протеините MyD88 и MAL / TIRAP. Успоредният на него път на сигнална трансдукция, също иницииран от свързването на липополизахаридите към TPR4, включва като начална вътреклетъчна връзка хетеродимерния TRAM/TRIF комплекс, който чрез мобилизиране на TANK-свързващата киназа 1 киназа създава условия за фосфорилиране и трансфер в ядрото на транскрипционния протеин IRF3 (интерферонов регулаторен фактор 3). Последният може също да бъде активиран в резултат на разгръщането на пътя на сигнална трансдукция, който започва с TPRZ, който е отговорен за откриването на двойноверижни РНК вируси или техни молекулни имитатори (полинозин/цитозин). В ядрото фосфорилираният IRF3 се свързва с регулаторните места на редица гени (IFN-a, IFN-P, RANTES, IP-10), инициирайки тяхната транскрипция, което води до синтеза на цитокини, които са необходими за образуването на защитните реакции на организма.

Въпросът дали флагелинът и бактериалната ДНК са директни лиганди за Toll-подобни рецептори на бозайници или дали индиректно инициират пътища на сигнална трансдукция, какъвто е случаят с Toll рецептора в Drosophila, остава отворен и до днес. Ясно е установено, че молекулите от микробен произход (PAMP) не са директни лиганди на Toll рецепторите в насекомите. Компонентите на грам-положителните бактерии са селективно свързани, циркулиращи в хемолимфата

Вроденият имунитет е най-ранният защитен механизъм както в еволюционно отношение (съществува в почти всички многоклетъчни организми), така и по отношение на времето за реакция, развивайки се в първите часове и дни след проникването на чужд материал във вътрешната среда, т.е. много преди да се развие адаптивният имунен отговор. Значителна част от патогените се инактивират от вродените механизми на имунитета, без да се доведе до развитието на имунен отговор с участието на лимфоцити. И само ако механизмите на вродения имунитет не могат да се справят с патогените, проникващи в тялото, лимфоцитите се включват в „играта“. В същото време адаптивният имунен отговор е невъзможен без участието на вродени имунни механизми. В допълнение, вроденият имунитет играе основна роля в отстраняването на апоптотични и некротични клетки и възстановяването на увредените органи. В механизмите на вродената защита на организма най-важна роля играят първичните рецептори за патогени, системата на комплемента, фагоцитозата, ендогенните антибиотични пептиди и защитните фактори срещу вируси - интерферони. Функциите на вродения имунитет са представени схематично на фиг. 3-1.

РЕЦЕПТОРИ ЗА РАЗПОЗНАВАНЕ НА “ИЗВЪНЗЕМНИ”.

На повърхността има микроорганизми повтарящи се молекулярни въглехидратни и липидни структури,които в по-голямата част от случаите отсъстват в клетките на тялото гостоприемник. Специални рецептори, които разпознават този „модел“ на повърхността на патогена - PRR (Рецептори за разпознаване на образи- рецептори за разпознаване на образи) - позволяват на вродените имунни клетки да откриват микробни клетки. В зависимост от местоположението се разграничават разтворими и мембранни форми на PRR.

. Циркулиращи (разтворими) рецепториза патогени - серумни протеини, синтезирани от черния дроб: липополизахариди-

Ориз. 3-1.Функции на вродения имунитет. Легенда: PAMP (Молекулярни модели, свързани с патогени)- молекулярни структури на микроорганизми, HSP (протеини от топлинен шок)- протеини на топлинен шок, TLR (Toll-подобни рецептори), NLR (NOD-подобни рецептори), RLR (РИГ-подобни рецептори)- клетъчни рецептори

извикващ протеин (LBP) Липополизахарид свързващ протеин),компонент на комплемента C1q и протеини на острата фаза MBL и С-реактивен протеин (CRP). Те директно свързват микробните продукти в телесните течности и осигуряват възможност за тяхното усвояване от фагоцитите, т.е. са опсонини (от гръцки. опсонеин- правейки го вкусно). Освен това някои от тях активират системата на комплемента.

- СРБ,свързвайки фосфорилхолин към клетъчните стени на редица бактерии и едноклетъчни гъбички, опсонизира ги и активира системата на комплемента по класическия път.

- MBLпринадлежи към семейството на колекционерите. Имайки афинитет към манозни остатъци, изложени на повърхността на много микробни клетки, MBL задейства лектиновия път на активиране на комплемента.

- Белодробни сърфактантни протеини- SP-AИ СП-Дпринадлежат към същото молекулярно семейство от колектини като MBL. Те вероятно са важни при опсонизацията (свързване на антитела към клетъчната стена на микроорганизъм) на белодробния патоген - едноклетъчна гъба Pneumocystis carinii.

. Мембранни рецептори.Тези рецептори са разположени както на външните, така и на вътрешните мембранни структури на клетките.

- TLR(Toll-подобен рецептор- Toll-подобен рецептор; тези. подобно на рецептора на Toll на Drosophila). Някои от тях директно свързват патогенни продукти (манозни рецептори на макрофаги, TLRs на дендритни и други клетки), други работят във връзка с други рецептори: например, молекулата CD14 върху макрофагите свързва бактериалните липополизахаридни (LPS) комплекси с LBP и TLR- 4 взаимодейства с CD14 и предава съответния сигнал в клетката. Общо 13 различни варианта на TLR са описани при бозайници (само 10 при хора досега).

. Цитоплазмени рецептори:

- NOD рецептори(NOD1 и NOD2) са разположени в цитозола и се състоят от три домена: N-терминален CARD домейн, централен NOD домейн (NOD - Домейн на нуклеотидна олигомеризация- домен на нуклеотидна олигомеризация) и С-терминален LRR домен. Разликата между тези рецептори е броят на CARD домейните. Рецепторите NOD1 и NOD2 разпознават мурамил пептиди, вещества, образувани след ензимна хидролиза на пептидогликан, който е част от клетъчната стена на всички бактерии. NOD1 разпознава мурамилови пептиди с терминиран мезодиаминопимелинова киселина (meso-DAPs), които се произвеждат само от пептидогликан на Грам-отрицателни бактерии. NOD2 разпознава мурамил дипептиди (мурамил дипептид и гликозилиран мурамил дипептид) с терминален D-изоглутамин или D-глутаминова киселина, резултат от пептидогликанова хидролиза както на Грам-положителни, така и на Грам-отрицателни бактерии. В допълнение, NOD2 има афинитет към L-лизин-терминирани мурамил пептиди, които се намират само в Грам-положителни бактерии.

- RIG-подобни рецептори(RLR, RIG-подобни рецептори): RIG-I (Ретиноева киселина-индуцируем ген I), MDA5 (Антиген, свързан с диференциация на меланома 5) и LGP2 (Лаборатория по генетика и физиология 2).

И трите рецептора, кодирани от тези гени, имат сходна химична структура и са локализирани в цитозола. Рецепторите RIG-I и MDA5 разпознават вирусна РНК. Ролята на протеина LGP2 все още е неясна; може би той действа като хеликаза, свързвайки се с двойноверижна вирусна РНК и я модифицирайки, което улеснява последващото разпознаване от RIG-I. RIG-I разпознава едноверижна РНК с 5-трифосфат, както и относително къси (<2000 пар оснований) двуспиральные РНК. MDA5 различает длинные (>2000 базови двойки) двойноверижна РНК. В цитоплазмата на еукариотната клетка няма такива структури. Приносът на RIG-I и MDA5 за разпознаването на специфични вируси зависи от това дали тези микроорганизми произвеждат подходящите форми на РНК.

ПРОВЕДЯВАНЕ НА СИГНАЛИ ОТ ТОЛ-ПОДОБНИ РЕЦЕПТОРИ

Всички TLR използват една и съща схема за предаване на сигнала за активиране към ядрото (Фигура 3-2). След свързване с лиганд, рецепторът привлича един или повече адаптери (MyD88, TIRAP, TRAM, TRIF), които осигуряват предаване на сигнала от рецептора към серин-треонин киназната каскада. Последните причиняват активиране на NF-kB транскрипционни фактори (ядрен фактор на k-верижни В-лимфоцити),АП-1 (Протеин активатор 1), IRF3, IRF5 и IRF7 (Интерферонов регулаторен фактор),които се преместват в ядрото и индуцират експресията на целевите гени.

Всички адаптери съдържат TIR домейн и се свързват с TIR домейните на TOLL-подобни рецептори (Toll/интерлевкин-1 рецептор,както и рецептора за IL-1) чрез хомофилно взаимодействие. Всички известни TOLL-подобни рецептори, с изключение на TLR3, предават сигнали през MyD88 адаптера (MyD88-зависим път). Свързването на MyD88 към TLR1/2/6 и TLR4 става чрез допълнителния адаптер TIRAP, който не се изисква в случай на TLR5, TLR7 и TLR9. Адаптерът MyD88 не участва в предаването на сигнал от TLR3; Вместо това се използва TRIF (независим от MyD88 път). TLR4 използва както MyD88-зависими, така и MyD88-независими пътища на сигнална трансдукция. Въпреки това, свързването на TLR4 към TRIF става чрез допълнителния адаптер TRAM.

Ориз. 3-2.Сигнални пътища от Toll-подобни рецептори (TLR). TLR3, TLR7, TLR9, посочени на фигурата, са вътреклетъчни ендозомални рецептори; TLR4 и TLR5 са мономерни рецептори, вградени в цитоплазмената мембрана. Трансмембранни димери: TLR2 с TLR1 или TLR2 с TLR6. Типът лиганд, разпознат от димерите, зависи от техния състав

MyD88-зависим път.Адаптерът MyD88 се състои от N-терминален DD домейн (домейн на смъртта- домейн на смъртта) и С-терминалният TIR домен, свързан с рецептора чрез хомофилно TIR-TIR взаимодействие. MyD88 набира IRAK-4 кинази (Интерлевкин-1 рецептор-свързана киназа-4)и IRAK-1 чрез взаимодействие с техните аналогични DD домейни. Това е придружено от тяхното последователно фосфорилиране и активиране. След това IRAK-4 и IRAK-1 се дисоциират от рецептора и се свързват с адаптера TRAF6, който от своя страна набира комплекса TAK1 киназа и убиквитин лигаза (не е показано на Фигура 3-2), което води до активиране на TAK1. TAK1 активира две групи цели:

. IκB киназа (IKK), състояща се от IKKα субединици, IKKβ и IKKγ. В резултат на това транскрипционният фактор NF-kB се освобождава от IκB протеина, който го инхибира и се премества в клетъчното ядро;

Каскада от митоген-активирани протеин кинази (MAP кинази), която насърчава активирането на АР-1 групови транскрипционни фактори. Съставът на AP-1 варира и зависи от вида на активиращия сигнал. Основните му форми са c-Jun хомодимери или c-Jun и c-Fos хетеродимери.

Резултатът от активирането на двете каскади е индуцирането на експресията на антимикробни фактори и възпалителни медиатори, включително фактор на туморна некроза алфа TNFa (TNFa), който, действайки върху клетките по автокринен начин, индуцира експресията на допълнителни гени. В допълнение, AP-1 инициира транскрипцията на гени, отговорни за пролиферацията, диференциацията и регулирането на апоптозата.

MyD88-независим път.Предаването на сигнала става чрез адаптера TRIF или TRIF:TRAM и води до активиране на TBK1 киназа, която от своя страна активира транскрипционния фактор IRF3. Последният индуцира експресията на интерферони тип I, които, подобно на TNF-α в MyDSS-зависимия път, засягат клетките автокринно и активират експресията на допълнителни гени (гени за отговор на интерферон).Активирането на различни сигнални пътища при TLR стимулация вероятно насочва вродената имунна система да се бори с определен тип инфекция.

Сравнителните характеристики на вродените и адаптивните механизми на резистентност са дадени в таблица. 3-1.

Съществуват субпопулации от лимфоцити със свойства, „междинни“ между тези на неклонотипни вродени имунни механизми и клонотипни лимфоцити с голямо разнообразие от антигенни рецептори. Те не пролиферират след свързване с антиген (т.е. не се извършва клонова експанзия), но производството на ефекторни молекули незабавно се индуцира в тях. Отговорът не е много специфичен и настъпва по-бързо от „същинския лимфоцитен“, не се формира имунна памет. Тези лимфоцити включват:

Интраепителни γδT лимфоцити с пренаредени гени, кодиращи TCRs с ограничено разнообразие, свързват лиганди като протеини на топлинен шок, атипични нуклеотиди, фосфолипиди, MHC-IB;

В1 лимфоцитите на коремната и плевралната кухина имат пренаредени гени, кодиращи BCRs от ограничено разнообразие, които имат широка кръстосана реактивност с бактериални антигени.

ЕСТЕСТВЕНИ УБИЙЦИ

Специална субпопулация от лимфоцити са естествените клетки убийци (NK клетки, естествени клетки убийци). Те се диференцират от обща лимфоидна прогениторна клетка и инвитроспособни спонтанно, т.е. без предварителна имунизация, убиват някои туморни клетки, както и клетки, заразени с вирус. NK клетките са големи гранулирани лимфоцити, които не експресират маркери на линията на Т и В клетки (CD3, CD19). В циркулиращата кръв нормалните клетки убийци съставляват около 15% от всички мононуклеарни клетки, а в тъканите те са локализирани в черния дроб (по-голямата част), червената пулпа на далака и лигавиците (особено репродуктивните органи).

Повечето NK клетки съдържат азурофилни гранули в цитоплазмата, където се отлагат цитотоксичните протеини перфорин, гранзими и гранулизин.

Основните функции на NK клетките са разпознаването и елиминирането на клетки, заразени с микроорганизми, променени в резултат на злокачествен растеж или опсонизирани от IgG антитела, както и синтеза на цитокини IFN, TNFa, GM-CSF, IL-8, IL-5. ИнвитроКогато се култивират с IL-2, NK клетките придобиват високо ниво на цитолитична активност към широк спектър от цели, превръщайки се в така наречените LAK клетки.

Общите характеристики на NK клетките са представени на фиг. 3-3. Основните маркери на NK клетките са CD56 и CD16 (FcγRIII) молекули. CD16 е рецепторът за Fc частта на IgG. NK клетките имат рецептори за IL-15, растежния фактор на NK клетките, както и IL-21, цитокин, който повишава тяхното активиране и цитолитична активност. Адхезионните молекули играят важна роля, осигурявайки контакт с други клетки и междуклетъчния матрикс: VLA-5 насърчава адхезията към фибронектин; CD11a/CD18 и CD11b/CD18 осигуряват прикрепване съответно към ендотелните молекули ICAM-1 и ICAM-2; VLA-4 - към ендотелната молекула VCAM-I; CD31, молекула на хомофилно взаимодействие, е отговорна за диапедезата (излизане през съдовата стена в околната тъкан) на NK клетки през епитела; CD2, рецепторът на овчи червени кръвни клетки, е адхезионна молекула, която

Ориз. 3-3.Обща характеристика на NK клетките. IL15R и IL21R са рецептори съответно за IL-15 и IL-21

взаимодейства с LFA-3 (CD58) и инициира взаимодействието на NK клетките с други лимфоцити. В допълнение към CD2, върху NK клетки човекОткриват се и някои други Т-лимфоцитни маркери, по-специално CD7 и CD8a хомодимера, но не и CD3 и TCR, което ги отличава от NKT лимфоцитите.

По отношение на техните ефекторни функции, NK клетките са близки до Т-лимфоцитите: те проявяват цитотоксична активност срещу таргетните клетки, използвайки същия перфорин-гранзимен механизъм като CTL (виж Фиг. 1-4 и Фиг. 6-4), и произвеждат цитокини - IFNy, TNF, GM-CSF, IL-5, IL-8.

Разликата между естествените клетки убийци и Т лимфоцитите е, че им липсва TCR и разпознават антигена.

MHC по различен (не съвсем ясен) начин. NK клетките не образуват клетки на имунната памет.

На NK клетки човекима рецептори, принадлежащи към семейството KIR (Имуноглобулиноподобни рецептори на клетки убийци),способни да свързват MHC-I молекули на собствените си клетки. Тези рецептори обаче не активират, а по-скоро инхибират функцията убиец на нормалните клетки убийци. В допълнение, NK клетките имат имунорецептори като FcyR и експресират CD8 молекулата, която има афинитет към

MHC-I.

На ниво ДНК KIR гените не се пренареждат, но на ниво първичен транскрипт възниква алтернативен сплайсинг, който осигурява известно разнообразие от варианти на тези рецептори във всяка отделна NK клетка. Всяка нормална клетка убиец експресира повече от един KIR вариант.

.Х.Г. ЛюнггренИ К. Карепрез 1990 г. формулират хипотеза "липсващо себе си"(„липса на себе си“), според която NK клетките разпознават и убиват клетки от тялото си с намалена или нарушена експресия на MHC-I молекули. Тъй като субнормалната експресия на MHC-I възниква в клетките по време на патологични процеси, например по време на вирусна инфекция или туморна дегенерация, NK клетките са способни да убиват заразени с вирус или дегенерирали клетки на собственото си тяло. Хипотеза "липсващо себе си"показано схематично на фиг. 3-4.

ДОПЪЛНИТЕЛНА СИСТЕМА

Комплементът е система от серумни протеини и няколко протеини на клетъчната мембрана, които изпълняват 3 важни функции: опсонизиране на микроорганизми за тяхната по-нататъшна фагоцитоза, иницииране на съдови възпалителни реакции и перфорация на мембрани на бактериални и други клетки. Допълнителни компоненти(Таблица 3-2, 3-3) се обозначават с буквите на латинската азбука C, B и D с добавяне на арабска цифра (компонентен номер) и допълнителни малки букви. Компонентите на класическия път се обозначават с латинската буква „C“ и арабски цифри (C1, C2 ... C9); за субкомпоненти на комплемента и продукти на разцепване към съответното обозначение се добавят малки латински букви (C1q, C3b и др. .). Активираните компоненти са маркирани с линия над буквата, неактивираните компоненти с буквата „i“ (например iC3b).

Ориз. 3-4.Хипотеза "липсващо себе си" (липса на собствен). Фигурата показва три вида взаимодействие между NK клетките и мишените. Има два вида рецептори за разпознаване на NK клетките: активиращи и инхибиторни. Инхибиторните рецептори разграничават MHC-I молекулите и инхибират сигнала от активиращите рецептори, които от своя страна откриват или MHC-I молекули (но с по-нисък афинитет от инхибиторните рецептори) или МНС-подобни молекули: a - целевата клетка не експресира активиране лиганди и не настъпва лизис; b - прицелната клетка експресира активиращи лиганди, но не експресира MHC-I. Такава клетка претърпява лизис; c - прицелните клетки съдържат както MHC-I молекули, така и активиращи лиганди. Резултатът от взаимодействието зависи от баланса на сигналите, идващи от активиращите и инхибиторните NK клетъчни рецептори

. Активиране на комплемента(фиг. 3-5). Обикновено, когато вътрешната среда на тялото е "стерилна" и не настъпва патологично разпадане на собствените му тъкани, нивото на активност на системата на комплемента е ниско. Когато микробните продукти се появят във вътрешната среда, системата на комплемента се активира. Може да се случи по три пътя: алтернативен, класически и лектин.

- Алтернативен път за активиране.Инициира се директно от повърхностните молекули на микробните клетки [факторите на алтернативния път са обозначени с букви: P (пропердин), B и D].

Ориз. 3-5.Активиране на системата на комплемента и образуване на мембранно атакуващ комплекс. За пояснения вижте текста, а също и таблицата. 3-2, 3-3. Активираните компоненти, съгласно международното споразумение, са подчертани

◊ От всички протеини на системата на комплемента С3 е най-разпространен в кръвния серум - нормалната му концентрация е 1,2 mg/ml. В този случай винаги има малко, но значително ниво на спонтанно разцепване на C3 с образуването на C3a и C3b. Компонент C3b е опсонин, т.е. той е способен да се свързва ковалентно както с повърхностните молекули на микроорганизмите, така и с рецепторите на фагоцитите. Освен това, „установен“ на клетъчната повърхност, C3b свързва фактор B. Това от своя страна се превръща в субстрат за серумна серин протеаза - фактор D, който го разделя на фрагменти Ba и Bb. C3b и Bb образуват активен комплекс на повърхността на микроорганизма, стабилизиран от пропердин (фактор Р).

◊ Комплексът C3b/Bb служи като C3 конвертаза и значително повишава нивото на C3 разцепване в сравнение със спонтанното разцепване. В допълнение, след свързване с C3, той разцепва C5 на фрагменти C5a и C5b. Малките фрагменти C5a (най-силните) и C3a са комплементни анафилатоксини, т.е. медиатори на възпалителния отговор. Те създават условия за миграция на фагоцити към мястото на възпалението, предизвикват дегранулация на мастоцитите и свиване на гладката мускулатура. C5a също предизвиква повишена експресия върху CR1 и CR3 фагоцити.

◊ С C5b започва образуването на "комплекс за атака на мембраната", причинявайки перфорация на мембраната на клетките на микроорганизма и техния лизис. Първо, комплексът C5b/C6/C7 се образува и се вкарва в клетъчната мембрана. Една от субединиците на компонента C8, C8b, се присъединява към комплекса и катализира полимеризацията на 10-16 молекули C9. Този полимер образува несвиваща се пора в мембраната с диаметър около 10 nm. В резултат на това клетките стават неспособни да поддържат осмотичен баланс и се лизират.

- Класически и лектинови пътищаса подобни един на друг и се различават от алтернативния начин на активиране на C3. Основната C3 конвертаза на класическия и лектиновия път е C4b/C2a комплексът, в който C2a има протеазна активност, а C4b ковалентно се свързва с повърхността на микробните клетки. Трябва да се отбележи, че протеинът C2 е хомоложен на фактор B, дори техните гени са разположени наблизо в локуса на MHC-III.

◊ Когато се активира чрез пътя на лектина, един от протеините на острата фаза - MBL - взаимодейства с манозата на повърхността на микробните клетки и свързаната с MBL серинова протеаза (MASP - Маноза-свързващ протеин-свързана серинова протеаза)катализира активиращото разцепване на С4 и С2.

◊ Сериновата протеаза на класическия път е C1s, една от субединиците на C1qr 2 s 2 комплекса. Той се активира, когато най-малко 2 C1q субединици се свържат с комплекса антиген-антитяло. По този начин класическият път на активиране на комплемента свързва вродения и адаптивния имунитет.

. Компонентни рецептори на комплемента.Има 5 вида рецептори за компонентите на комплемента (CR - Рецептор на комплемента)върху различни клетки на тялото.

CR1 се експресира върху макрофаги, неутрофили и еритроцити. Той свързва C3b и C4b и в присъствието на други стимули за фагоцитоза (свързване на комплекси антиген-антитяло чрез FcyR или когато е изложен на IFNu, продукт на активирани Т-лимфоцити), има разрешаващ ефект върху фагоцитите. CR1 на еритроцитите, чрез C4b и C3b, свързва разтворимите имунни комплекси и ги доставя до макрофагите на далака и черния дроб, като по този начин осигурява изчистване на имунните комплекси от кръвта. Когато този механизъм е нарушен, имунните комплекси се утаяват - предимно в базалните мембрани на съдовете на гломерулите на бъбреците (CR1 присъства и в подоцитите на гломерулите на бъбреците), което води до развитие на гломерулонефрит.

CR2 на В лимфоцити свързва продуктите на разграждане на C3 - C3d и iC3b. Това повишава чувствителността на В-лимфоцита към неговия антиген с 10 000-100 000 пъти. Същата мембранна молекула - CR2 - се използва като свой рецептор от вируса Epstein-Barr, причинителят на инфекциозната мононуклеоза.

CR3 и CR4 също свързват iC3b, който, подобно на активната форма на C3b, служи като опсонин. Ако CR3 вече е свързан с разтворими полизахариди като бета-глюкани, свързването на iC3b само с CR3 е достатъчно за стимулиране на фагоцитозата.

C5aR се състои от седем домена, които проникват през клетъчната мембрана. Тази структура е характерна за рецепторите, свързани с G протеини (протеини, способни да свързват гуанин нуклеотиди, включително GTP).

. Защита на вашите собствени клетки.Собствените клетки на тялото са защитени от разрушителните ефекти на активния комплемент благодарение на така наречените регулаторни протеини на системата на комплемента.

-C1 -инхибитор(C1inh) разрушава връзката на C1q към C1r2s2, като по този начин ограничава времето, през което C1s катализира активиращото разцепване на C4 и C2. В допълнение, C1inh ограничава спонтанното активиране на C1 в кръвната плазма. При генетичен дефект dinh се развива наследствен ангиоедем. Патогенезата му се състои в хронично повишено спонтанно активиране на системата на комплемента и прекомерно натрупване на анафилактични вещества (C3a и C5a), причиняващи оток. Заболяването се лекува със заместителна терапия с препарата динх.

- C4 -свързващ протеин- C4BP (С4-свързващ протеин)свързва C4b, предотвратявайки взаимодействието на C4b и C2a.

- DAF(Фактор, ускоряващ разпадането- фактор за ускоряване на разграждането, CD55) инхибира конвертазите на класическия и алтернативния път на активиране на комплемента, блокирайки образуването на мембранно атакуващ комплекс.

- Фактор Х(разтворим) измества фактор B от комплекса с C3b.

- Фактор I(серумна протеаза) разцепва C3b на C3dg и iC3b и C4b на C4c и C4d.

- Мембранен кофакторен протеин MCP(мембранен кофактор протеин, CD46) свързва C3b и C4b, като ги прави достъпни за фактор I.

- Protectin(CD59). Свързва се с C5b678 и предотвратява последващо свързване и полимеризация на C9, като по този начин блокира образуването на мембранно атакуващ комплекс. При наследствен дефект в протектина или DAF се развива пароксизмална нощна хемоглобинурия. При такива пациенти се появяват епизодични атаки на интраваскуларен лизис на техните собствени червени кръвни клетки от активиран комплемент и хемоглобинът се екскретира от бъбреците.

ФАГОЦИТОЗА

Фагоцитоза- специален процес на абсорбция от клетка на големи макромолекулни комплекси или корпускулярни структури. "Професионални" фагоцитипри бозайниците има два вида диференцирани клетки - неутрофили и макрофаги, които узряват в костния мозък от HSC и имат обща междинна прогениторна клетка. Самият термин "фагоцитоза" принадлежи на I.I. Мечников, който описва клетките, участващи във фагоцитозата (неутрофили и макрофаги) и основните етапи на фагоцитния процес: хемотаксис, абсорбция, храносмилане.

Неутрофилисъставляват значителна част от левкоцитите на периферната кръв - 60-70%, или 2,5-7,5x10 9 клетки в 1 литър кръв. Неутрофилите се образуват в костния мозък, като основният продукт на миелоидната хематопоеза. Те напускат костния мозък на предпоследния етап на развитие - пръчковидна форма, или на последния етап - сегментирана форма. Зрелият неутрофил циркулира в продължение на 8-10 часа и навлиза в тъканта. Общата продължителност на живота на неутрофила е

2-3 дни. Обикновено неутрофилите не напускат съдовете в периферните тъкани, но те са първите, които мигрират (т.е. претърпяват екстравазация) към мястото на възпалението поради бързата експресия на адхезионни молекули - VLA-4 (лиганд върху ендотела - VCAM- 1) и интегрин CD11b/CD18 (лиганд върху ендотела - ICAM-1). Ексклузивни маркери CD66a и CD66d (карциноембрионални антигени) бяха идентифицирани на тяхната външна мембрана. Фигура 3-6 показва участието на неутрофилите във фагоцитозата (миграция, поглъщане, дегранулация, вътреклетъчно убиване, разграждане, екзоцитоза и апоптоза) и основните процеси, протичащи в тези клетки при активиране (от хемокини, цитокини и микробни вещества, по-специално PAMPs) - дегранулация, образуване на реактивни кислородни видове и синтез на цитокини и хемокини. Апоптозата на неврофилите и тяхната фагоцитоза от макрофаги може да се счита за важен компонент на възпалителния процес, тъй като тяхното навременно отстраняване предотвратява разрушителния ефект на техните ензими и различни молекули върху околните клетки и тъкани.

Ориз. 3-6.Основните процеси, протичащи в неутрофилите (NF) по време на тяхното активиране и фагоцитоза

Моноцити и макрофаги.Моноцитите са "междинна форма", в кръвта те представляват 5-10% от общия брой левкоцити. Тяхната цел е да станат резидентни макрофаги в тъканите (фиг. 3-7). Макрофагите са локализирани в определени области на лимфоидната тъкан: медуларни връзки на лимфни възли, червена и бяла пулпа на далака. Клетки, получени от моноцити, присъстват в почти всички нелимфоидни органи: Купферови клетки в черния дроб, микроглия на нервната система, алвеоларни макрофаги, Лангерхансови клетки на кожата, остеокласти, макрофаги на лигавиците и серозните кухини, интерстициална тъкан на сърце, панкреас, мезангиални клетки на бъбреците (на фигурата не е показано). Макрофагите помагат за поддържане на хомеостазата, като изчистват тялото от стареещи и апоптични клетки и възстановяват тъкан след инфекция и нараняване. Макрофаги

Ориз. 3-7.Хетерогенност на клетките, получени от моноцити. Тъканните макрофаги (TMCs) и дендритните клетки (DCs) са получени от моноцити от периферна кръв (MNs).

лигавиците играят водеща роля в защитата на тялото. За да реализират тази функция, те имат набор от рецептори за разпознаване, кислород-зависими и кислород-независими механизми за убиване на микроорганизми. Макрофагите на алвеоларната и чревната лигавица играят важна роля в защитата на организма от инфекции. Първите „работят“ в относително бедна на опсонин среда, така че те експресират голям брой рецептори за разпознаване на образи, включително рецептори за очистване, манозни рецептори, β-глюкан-специфични рецептори, дектин-1 и др. По време на микробна инфекция, a голям брой възпалителни моноцити допълнително мигрират към мястото на микробно проникване, способни да се диференцират в различни клетъчни линии в зависимост от цитокиновата среда.

Рецептори на мембраната на макрофагите

.CD115 (CSF-1R)- рецептор за моноцитен колониестимулиращ фактор (M-CSF). Присъства и на мембраната на плурипотентната прекурсорна клетка на гранулоцитите и моноцитите и унипотентния прекурсор на моноцитите.

Рецептори на клетъчната мембрана на макрофагите, участващи в процеса на фагоцитоза.

-CD14- рецептор за комплекси от бактериални LPS със серумни протеини, които свързват LPS (LBP), както и липоарабиноманан на клетъчната стена на микобактерии и липотейхоева киселина на грам-положителни бактерии.

Рецептори за фрагменти от фосфолипидни мембрани и други компоненти на техните собствени увредени и умиращи клетки (рецептори за "чистач", акцепторни рецептори). Например, CD163 е рецептор за "стари" червени кръвни клетки.

-Рецептор за свързване на маноза(Макрофагов манозен рецептор).Той присъства върху мембраната на тъканните макрофаги и свързва бактерии, вируси и гъбички чрез повърхностни структури, съдържащи маноза.

- Рецептори за комплемента- CR3(интегрин CD11b/CD18) и CR4(интегрин CD11c/CD18). Освен комплемента, те свързват и редица бактериални продукти: LPS, липофосфогликан лейшмания,хемаглутинин от филаменти Бордетела,повърхностни структури на клетки от дрожди Кандидаи гъбички Хистоплазма.

- CD64- рецептор за Fc фрагменти на IgG - FcγRI (Fcy рецептор от първи тип), осигуряващ фагоцитоза на имунни комплекси от макрофаги. Силата на свързване на FcyRI с имуноглобулини от различни изотипове намалява в реда: IgG3 > IgG1 > IgG4 >

IgG2.

Рецептори, които взаимодействат с лимфоцитите. Наред с вече споменатия CD64, те включват:

- рецептори за цитокини,произведени от активирани лимфоцити. Свързването с IFN и тумор некротизиращ фактор (TNF) активира макрофага. Чрез рецептора за IL-10, макрофагът, напротив, се инактивира;

- CD40, B7, MHC-II- мембранни молекули за контакти с комплементарни мембранни молекули на лимфоцити, т.е. за директни взаимодействия между клетките. Неутрофилите нямат такива рецептори.

Последици от фагоцитоза.След като фагоцитът покрие погълнатия обект с мембраната си и го затвори в мембранна везикула, наречена фагозома, настъпват следните събития.

.Разцепване на фагоцитиран материал.Този процес следва същите биохимични механизми във всички фагоцити.

- Лизозоми- специални вътреклетъчни органели, съдържащи набор от хидролитични ензими (киселинни протеази и хидролази) с оптимално рН около 4,0. В клетката лизозомите се сливат с фагозомите, за да образуват фаголизозома, където протичат реакции на разграждане на абсорбирания материал.

- Ензимни системи. NADP-H оксидазите, супероксиддисмутазата, NO синтазите генерират активни форми на неорганични оксиданти, участващи в разрушаването на фагоцитирания обект: водороден пероксид (H 2 O 2), супероксиден анион (O 2 -), синглетен кислород (1 O 2), радикал хидроксил (OH -), хипохлорид (OCl -), азотен оксид (NO). Активирането на NADP-H оксидазата води до образуването на така наречената „кислородна експлозия” (фиг. 3-8). Основният продукт на „кислородната експлозия” е супероксидният анион O 2 -, който се образува, когато NADP-H оксидазата прехвърли електрон към кислород. Супероксидният анион има слаб бактерициден ефект и е краткотраен. В резултат на реакцията, катализирана от ензима супероксид дисмутаза (SOD), водородният пероксид се образува от две молекули супероксиден анион,

Ориз. 3-8.Образуване на реактивни кислородни видове от фагоцити („кислородна експлозия“). Обозначения: NADPH оксидаза - NADPH-H оксидаза, NADP - NADP

осигурявайки силен микробициден ефект. Когато хлоридите се окисляват с водороден пероксид в присъствието на миелопероксидаза (MPO), се образува мощен цитотоксичен агент - хипохлорна киселина HOCl, когато се окисляват от супероксиден радикал - хидроксилен радикал OH, когато хипохлоритният йон се окислява с водороден пероксид, синглетен кислород 1 Образува се O 2, който е източник на образуването на друго бактерицидно вещество - озон O 3 (не е показано на фигурата). Когато хипохлорната киселина взаимодейства с аминогрупа

образува се микробицидно производно на монохлорамина, R-NHCl.

.Секреция на литични ензими и окислителни радикали в междуклетъчното пространство,където имат и бактерициден ефект, но в същото време засягат и собствените си тъкани. Неутрофилите, в допълнение към вече споменатите вещества, произвеждат и секретират колагеназа, катепсин G, желатиназа, еластаза и фосфолипаза А2.

.Образуване и секреция на цитокини.Макрофагите и неутрофилите, активирани от микробни продукти, започват да произвеждат цитокини и други биологично активни медиатори, които инициират възпалителни реакции на мястото на проникване на чужди агенти, подготвяйки възможността за развитие на адаптивен имунен отговор.

Макрофагите произвеждат интерлевкини (IL-1, IL-6, IL-12); хемокин IL-8; фактор на туморна некроза а (TNFa); простагландини; левкотриен В4 (LTB4); тромбоцитен активиращ фактор (PAF).

Неутрофилите произвеждат TNFa, IL-12, хемокин IL-8, LTB4

и МАЗНИНИ.

.Обработка и представяне на антиген- образуване вътре в клетките на комплекси от продуктите на разпадане на фагоцитиран материал с техните собствени молекули MHC-II и експресия на тези комплекси върху клетъчната повърхност за представяне на антигени на Т-лимфоцити. Този процес се осъществява от APC: DC, макрофаги и др.

ЕНДОГЕННИ АНТИМИКРОБНИ ПЕПТИДИ - ПРИРОДНИ АНТИБИОТИЦИ

Пептиди с антибиотична активност се намират в клетките на много еукариоти, от растения до хора. Те се образуват чрез обработка на по-големи прекурсорни протеини и съдържат 13-80 аминокиселинни остатъка. Изследването на антимикробните пептиди в момента е една от най-новите области на изследване. Базата данни с антибиотични пептиди съдържа над 1200 елемента.

Има няколко групи антибиотични пептиди, от които така наречените дефензини са важни за хората - пептиди, съдържащи

компресиране на няколко цистеина, между които се образуват 3 дисулфидни връзки. α-Дефензините се намират в неутрофилни гранули. Синтезът на β-дефензини се извършва в клетките на покривните тъкани - епитела на дихателните пътища и храносмилателния тракт (фиг. 3-9). Основните източници на α-дефензини от типове I-IV са неутрофили и макрофаги, α-дефензини от типове V-VI са чревни Punnett клетки; β-дефензини - ендотелни клетки и кератиноцити. Дефензините са многофункционални агенти, които играят важна роля в процеса на фагоцитоза и възпаление. Първият ефект е способността да се убиват бактерии, гъбички и вируси с обвивка. Може да се реализира вътреклетъчно (във фаголизозомата) и извънклетъчно. В резултат на екзоцитозата могат да се натрупат доста големи концентрации на дефензини във възпалителния фокус. Дефензините индуцират синтеза на IL-8 и сами по себе си са хемоатрактанти. Те имат редица не-

Ориз. 3-9.Дефензини и тяхната роля в процеса на възпаление и фагоцитоза: а - източници на дефензини; b - ефекти на дефензините. Обозначения: MN - моноцити

специфични ефекти: стимулиране на ангиогенезата, заздравяване на рани, индуциране на апоптоза и инхибиране на синтеза на TNF, което е важно в крайните стадии на възпаление. В същото време дефензините стимулират DC диференциацията.

Генетичните дефекти на антибиотичните пептиди или кофактори, необходими за тяхното функциониране (например йонни канали, тъй като активността на антибиотичните пептиди е „силно чувствителна“ към йонната сила), вероятно корелират с развитието на прогресивна хронична патология с инфекциозни фактори в етиологията. Например, днес има доказана връзка между развитието на кистозна фиброза и мутация в гена на регулатора на проводимостта на мембраната CFTR, което може да определи намаляване на активността на β-дефензин в епитела на дихателните пътища.

ИНТЕРФЕРОНИ ТИП I

Интерфероните са открити като антивирусни защитни фактори през 1957 г. от A. Isaacs и J. Lindenmann. Има интерферони от тип I, II и III. При хората тип I включва IFNα, IFNβ, IFNκ, IFNω, IFNε. Основната роля във вродената защита срещу вируси принадлежи на IFNα (включва 13 члена) и IFNβ (представен от един член). IFNα и IFNβ се състоят от единична α-спирална верига от 165 и 166 аминокиселинни остатъка, съответно. Хомоложността между веригите е около 70%. Интерфероните тип II включват IFNy, а интерфероните тип III включват интерфероноподобни цитокини IFN-λ1 (IL-29), IFN-λ2 (IL-28A) и IFN-λ3 (IL-28B).

Смята се, че основният източник на интерферони тип I в тялото са плазмоцитоидните DC. Интерфероните са малки протеини, синтезирани в инфектирани с вирус клетки. Индукторът на синтеза на интерферон е двуверижна РНК молекула. Двуверижната РНК може да бъде геномна РНК на вируси или транскрипционен междинен продукт в ДНК вируси. Клетките на бозайниците нямат собствена двойноверижна РНК.

Интерфероните тип I се свързват със специфични рецептори на повърхността на много видове клетки на имунната система и стимулират антивирусни и в някои случаи антитуморни имунни отговори. Тези действия са описани по-подробно по-долу и представени на фиг. 3-10.

Ориз. 3-10.Функции на IFNα/β

Ефект на IFNα/β върху дендритни клетки и В лимфоцити (фиг. 3-11)

IFNα/β стимулира трансформацията на незрели DC (1) в зрели (2). Това води до техния повишен синтез на цитокини, хемокини, експресия на МНС молекули, особено клас I, костимулиращи молекули, експресия и секреция на основните фактори за оцеляване и активиране на В2 клетките - BAFF и APRIL. Тези лиганди, взаимодействайки съответно с B-клетъчните рецептори BAFFR и TACI, с участието на цитокините IL10, TGFβ и IL-15, синтезирани от активирани DCs, причиняват в наивните B клетки (3) превключване на имуноглобулиновите гени CμCγ и Cμ-Cα и узряването им в IgG(4)- и IgA(5)-плазмобласти. IFNα/β причинява активиране на макрофагите със същите последствия както при DC (не са показани на Фиг. 3-11). IFNα/β са необходими цитокини за узряването и пролиферацията на В1 клетките, основните производители на естествени автоантитела в тялото.

Влияние на IFNα/в върху Т клетки(фиг. 3-11)

IFNα/β насърчава оцеляването и пролиферацията на CD4 + и CD8 + Т клетки. IFNα/β подобрява цитотоксичните свойства на CD8 + Т клетките, както и на макрофагите и NK клетките (не са показани на Фиг. 3-11). В същото време IFNα/β имат мощен антипролиферативен и проапоптотичен ефект, повишавайки експресията на проапоптотични молекули. Наличие както на пролиферативни, така и на антипролиферативни свойства

Ориз. 3-11.Ефект на IFNα/β върху клетките на имунната система. Обозначения: Blys и April - фактори на оцеляване и активиране на B2 клетки BAFF и APRIL; BAFFR и TACI са В клетъчни рецептори. Стъпки 1-5 са описани в текста

Това вероятно се дължи на включването в различни етапи на инфекциозния процес или адаптивния имунен отговор на различни регулаторни механизми, които определят чувствителността на клетката към действието на IFNa/r.

Интерфероните тип I индуцират ензими, които нарушават цикъла на репликация на вирусите:

Олигоаденилат синтетаза, която полимеризира АТФ в 2,5" олигомери (обикновено нуклеотидите в нуклеиновите киселини са свързани в 3,5") групи. Анормалните 2,5" олигомери активират ендорибонуклеазата, която ги разцепва и в същото време вирусните нуклеинови киселини;

Серин треонин киназа Р1, която фосфорилира фактора за иницииране на еукариотния протеинов синтез eIF-2, което води до потискане на транслацията, включително на вирусни протеини;

MX протеинът е клетъчен протеин, необходим за проявата на клетъчна резистентност към репродукцията на грипния вирус в него (според генетичния нокаут на гена mx).

ФАКТОРИ НА ВРОДЕНИЯ ИМУНИТЕТ

В табл 3-4 изброява различни фактори (молекули) на вродена резистентност, принадлежащи към различни функционални класове (лектини, LPS-реактивни протеини, активатори на комплемента, цитокини, липидни медиатори, острофазови реагенти, пентраксини).

UDC 571.27; 578.224

TLL-подобни рецептори (TLRs) и тяхната роля в прогресията на тумора

Д. В. Щебляков, Д. Ю. Логунов*, А. И. Тухватулин, М. М. Шмаров, Б. С. Народицки,

A.L.Gintsburg

Изследователски институт по епидемиология и микробиология на FBGU, кръстен на. Н.Ф. Gamaleyi Министерство на здравеопазването и социалното развитие на Руската федерация, 123098, Москва, ул. Гамалеи, 18 *E-mail: [имейл защитен]Получено в редакцията на 28.08.2010 г.

РЕЗЮМЕ Toll-подобните рецептори (TLRs) са основните компоненти на вродената имунна система, които медиират специфичното разпознаване на еволюционно запазени молекулярни модели на патогени (PAMPs - pathogen associated molecular patterns). Toll-подобни рецептори присъстват върху клетки от различен тип - от епителни до имунокомпетентни. Както е известно, когато TLR се свързва със собствените си лиганди, се активират редица адапторни протеини и кинази, които участват в индуцирането на ключови провъзпалителни фактори. Резултатът от такава индукция е развитието както на вроден имунен отговор в резултат на повишена експресия на редица антиапоптотични протеини, провъзпалителни цитокини, антибактериални протеини, така и на придобит имунен отговор чрез узряването на дендритни клетки, антиген презентация и др. Благодарение на способността им да усилват специфичните и неспецифичните имунни отговори на организма, агонистите на Toll-подобен рецептор са намерили приложение не само при лечението на инфекциозни заболявания, но и като адюванти в химиотерапията на различни злокачествени неоплазми. Въпреки това, досега са описани фундаментално различни ефекти на TLRs върху тумори. От една страна, доказано е, че TLR (и техните лиганди) могат да действат като супресори на туморния растеж; от друга страна, TLR могат да стимулират туморната прогресия и да повлияят на резистентността на туморите към химиотерапия. Този преглед обобщава данните за ефекта на TLR и техните агонисти върху растежа на тумора и също така анализира основните механизми, лежащи в основата на тези разлики.

КЛЮЧОВИ ДУМИ Toll-подобни рецептори, вродени имунни рецепторни агонисти, тумор, вроден имунен отговор, възпаление.

СПИСЪК НА СЪКРАЩЕНИЯТА TLR - Toll-подобни рецептори; LPS - липополизахарид; NF-kB - ядрен транскрипционен фактор kB; PRR - рецептори за разпознаване на образи; PAMPs - молекулярни модели, свързани с патогени; DAMPs - увреждане на свързаните молекулярни модели; IRF - интерферон регулаторен фактор, ss- и dsRNA - едно- и двуверижна рибонуклеинова киселина; TNF-a - тумор некрозис фактор а; IL - интерлевкин; IFN - интерферон; NK клетки – естествени клетки убийци; siPHK - малка интерферираща РНК; TGF - трансформиращ растежен фактор.

ВЪВЕДЕНИЕ химически фактор, който активира генната експресия

Според съвременните концепции възпалението се причинява от редица антиапоптотични протеини, като IAP,

е една от основните причини за появата и про- Bcl-2, Bcl-XL и др. Наличието на тези протеини се увеличава

прогресиране на туморни заболявания. Механизмът определя устойчивостта на клетките към различни стресови състояния.

тази връзка не е проучена достатъчно напълно, но влиянията, които възникват по време на развитието на повторното

Днес са ясни редица ключови събития, които са се случили.

2) Процесът на възпаление се придружава от индукция

развитие и прогресия на тумора. оксидативен стрес - причина за появата и на-

1) В клетките, разположени на мястото на възпалението, натрупването на мутации, както и генетичните пренареждания, поддържат постоянно висока активност в клетките.

транскрипционен фактор NF-kB, отговорен- 3) В крайните етапи на възпалението секретира-

Поради експресията на провъзпалителни цитокини, има голям брой провъзпалителни цито- много от които (GROa, P, y, IL-8, MIP-3a) облаци (GROa/CXCL1, GROP/CXCL2, GROy /CXCL3

дават тумор-стимулиращ ефект. Bo- и IL-8/CXCL8, MIP-3a, IL-1) и растежни фактори

Освен това NF-kB се счита за основния антиапоптотик (TGF-^1, PDGF, bFGF, TGF-a, IGF-I, IGF-II), ко-

които засилват миграцията на стромални клетки (фибробласти) и епителни клетки към мястото на възпалението, както и последващата им пролиферация. При хронично възпаление процесите на възстановяване и промяна често протичат едновременно, което кара клетките да пролиферират в условия на хипоксия и генотоксичен стрес, като по този начин увеличават риска от мутации.

Най-честата и добре проучена причина за възпаление е микробна инвазия, по време на която патогенът е в състояние да наруши хомеостазата на клетката гостоприемник по различни начини.

Един от тези механизми е взаимодействието на силно запазени региони на патогенни молекули с еукариотна клетка чрез рецептори за разпознаване на образи (PRR - RIG-I-подобни рецептори, Nod-подобни рецептори, C-тип лектини, Toll-подобни рецептори (TLR), и т.н.), разположени на повърхността и/или вътре в еукариотните клетки.

Чрез свързване на различни бактериални лиганди, PRRs играят ключова роля в развитието на възпаление, инициирайки развитието както на вроден имунен отговор (повишаване на експресията на редица антиапоптотични протеини, провъзпалителни цитокини, антибактериални протеини), така и на придобит (индуциране на узряване на дендритни клетки, представяне на уловен антиген, диференциация на наивни Т хелперни клетки).

В тази връзка става уместно да се проучи ролята на PRR в индуцирането на туморно образуване и стимулиране на туморната прогресия по време на развитието на бактериална инфекция.

В този преглед ще се съсредоточим върху ролята на TLRs в развитието на възпалителни реакции и ще се опитаме да оценим връзката им с прогресията на тумора.

Днес са натрупани доказателства, които показват, че TLRs са свързани с растежа на тумора. Към днешна дата обаче са публикувани противоречиви данни, потвърждаващи както стимулиращия тумор, така и потискащия тумора ефект на TLR.

В тази връзка целта на нашия преглед е да систематизираме наличните данни и да опишем възможните механизми, отговорни за разликите в ефектите на TLR върху туморния растеж.

KR функция

Въз основа на функциите, които изпълняват в тялото, TLRs принадлежат към семейството на PRRs, които медиират специфичното разпознаване на еволюционно запазени структури на патогени (PAMP - патогенни свързани молекулни модели). Чрез свързване с PAMP, TLRs активират вродената имунна система и до голяма степен определят развитието на адаптивен имунитет. Най-консервативната роля на TLR е активирането на антимикробния имунитет в кожата, лигавиците на дихателните, стомашно-чревния и урогениталния тракт.

TLR разпознават микробни молекули, което води до развитие на възпалителни реакции, причинени от активиране на фактора NF-kB, който регулира експресията на провъзпалителни цитокини (TNF-a, IL-1, IL-6 и др.) и хемокини (MCP). -1, MCP-3, GM-CSF и др.).

TLR участват в транскрипционната и пост-транслационната регулация (протеолитично разцепване и секреция) на антимикробни фактори като дефензини (а и b), фосфолипаза А2, лизозим и др. TLR засилват поглъщането на микроорганизми от фагоцити и оптимизират тяхното инактивиране чрез регулиране на освобождаването на пероксидни радикали и азотен оксид.

Известно е, че TLR, разположени на повърхността на ендотелните клетки, индиректно осигуряват миграцията на левкоцитите към мястото на възпалението, стимулирайки експресията на левкоцитни адхезионни молекули E-selectin и ICAM-1.

Стимулирането на TLR директно води до увеличаване на производството на интерферони (IFN)-a/p както от стромалните, така и от хематопоетичните клетки, което е важно за защитата на организма от вирусни и някои бактериални инфекции. Освен това наскоро беше установено, че TLR, чрез активиране на редица молекули (FADD, каспаза 8, протеин киназа R (PKR)) или стимулиране на експресията на IFN-a/b, могат да индуцират развитието на апоптоза, важен механизъм, който предпазва клетките от патогенни микроорганизми.

Доказано е, че TLR играят централна роля в регулирането на адаптивния имунен отговор. По този начин, TLR-зависимото активиране на професионални антиген-представящи дендритни клетки е определящ фактор в няколко процеса, които са основни за развитието на адаптивен имунитет: активиране на зрели Т клетки; обработка и представяне на микробни антигени; повишена експресия на костимулиращи молекули (CD80, CD86), необходими за активирането на наивни CD4 + Т клетки; потискане на регулаторните Т клетки чрез производството на IL-6. TLR-зависимото активиране също е известно, че е важно за В клетъчната пролиферация и съзряване по време на инфекция.

По този начин TLRs играят важна роля в тялото, което е развитието на възпалителни реакции (активиране на вродения имунитет) в отговор на навлизането на различни патогени в тялото (протозои, гъбички, бактерии, вируси). Освен това, според съвременните концепции, разпознаването на патогени чрез TLR е ключов момент при формирането на втория

линия на защита - адаптивен имунитет. Доказано е също, че TLR участват в нормалното функциониране на червата, участват в развитието на автоимунни заболявания (системен лупус), артрит, атеросклероза и др. Наскоро бяха получени данни, които показват, че TLR са способни да активират антитуморен имунитет или, обратно, да стимулират прогресията на тумора.

СТРУКТУРА НА TLR, ТЯХНАТА ЕКСПРЕСИЯ ОТ РАЗЛИЧНИ ВИДОВЕ КЛЕТКИ, СПЕЦИФИЧНОСТ ПО ОТНОШЕНИЕ НА РАЗЛИЧНИТЕ МОЛЕКУЛНИ СТРУКТУРИ (PAMP И DAMP)

Въз основа на тяхната структурна организация, TLRs принадлежат към семейството на IL-1 рецепторите (IL-1R). TLRs са трансмембранни протеини, които се експресират върху клетъчната повърхност и в субклетъчни отделения (като ендозоми). Локализацията на TLR е свързана с типа лиганд, който разпознава. Така TLR 1, 2, 4, 5, 6, които свързват структурните бактериални компоненти, са локализирани на клетъчната повърхност, докато TLR 3, 7, 8, 9, които разпознават предимно вирусно-асоциирани структури - нуклеинови киселини (dsRNA, ssRNA , ДНК), се намират в ендозоми, където взаимодействат с лиганди след депротеинизация на вириони.

TLR структурата включва N-терминален богат на левцин (LRR) домен, отговорен за свързването на лиганда, трансмембранен домен и С-терминален вътреклетъчен сигнализиращ домен (хомоложен на вътреклетъчния домен на IL-1R).

TLR се експресират в повечето видове клетки в човешкото тяло, включително нехемопоетични епителни и ендотелни клетки. Броят на едновременно експресираните TLR и тяхната комбинация са специфични за всеки тип клетка,

и TLR е най-разпространен в клетки от хематопоетичен произход, като макрофаги, неутрофили и дендритни клетки (Таблица 1).

В момента са идентифицирани 13 различни TLR при бозайници, 10 при хора и 12 при мишки. TLR от 1 до 9 се запазват между хора и мишки. Има обаче и разлики. Генът, кодиращ TLR10, се среща само при хора, докато TLR11 се среща и при двата вида, но функционира само при мишки.

Основната характеристика на TLRs, която ги отличава от придобитите имунни рецептори (T- и B-клетъчни рецептори), е тяхната способност да разпознават не уникални епитопи, а еволюционно запазени патоген-свързани молекулни структури (PAMPs), широко представени във всички класове на микроорганизми и вируси, независимо от тяхната патогенност.

Специфичността на разпознаването на PAMP е сравнително добре проучена за повечето TLR; днес са известни TLR лиганди 1-9 и 11 (фиг. 1). Биологичната роля и спецификата на TLR10 (човешки), 12 и 13 (мишки) остават неизвестни.

Най-известните микробни TLR лиганди са:

Бактериални липопептиди, липотейхоева киселина и пептидогликани; микобактериален липоарабидоманан; компонент на клетъчната стена на гъбичките, зимозан, който се свързва с TLR2, образувайки хетеродимери с TLR1, TLR6 и CD14;

LPS от грам-отрицателни бактерии, TLR4 лиганд;

Компонент на бактериалните флагели е флагелинът, който активира TLR5;

Профилиноподобни структури на протозои, свързващи се с TLR11;

ДНК (неметилирани CpG последователности), разпознати от TLR9;

dsRNA - TLR3 лиганд;

ssRNA са лиганди за TLR7 и TLR8.

Ориз. 1. Toll-подобни рецептори и техните лиганди.

Бактериални компоненти

Липопротеини Липоарабидоманан Липотейхоеви киселини Зимозан (дрожди)

T. gondi LPS Flaggelin Profillin

TLR4 =TLR5 =TLR11

Вирусни компоненти

Без етикет

блуждаех

CpG ДНК dsRNA ssRNA

ÜTLR9 =TLR3 =TLR7

Наскоро беше показано, че TLR могат да се активират от много ендогенни молекули - алармини (хиалуронова киселина, протеини на топлинен шок и др.), които се появяват по време на разрушаването на тъканите. Тези съединения, хетерогенни по природа и структура (PAMPs и allarmins), разпознати от TLRs, в момента са комбинирани в едно семейство, наречено DAMPs (свързани с увреждане молекулни модели).

КАСКАДА ОТ СИГНАЛИ, АКТИВИРАНИ СЛЕД ВЗАИМОДЕЙСТВИЕТО НА TLR СЪС СОБСТВЕНИ ЛИГАНДИ

Сега, от описанието на структурата и функциите на TLR, нека преминем към събитията, които се развиват, след като те се свържат със собствените си лиганди.

Свързването на лиганд към TLR инициира каскада от сигнали, произхождащи от цитоплазмените TIR домени на TLR. Сигналът от TIR домейна през адаптерните молекули MyD88 (фактор на миелоидна диференциация 88), TIRAP (TIR домейн-съдържащи адаптери), TICAM1 (TRIF), TICAM2 (TIR-съдържаща адаптерна молекула) се предава към съответните кинази (TAK, IKK , TBK, MAPK, JNKs, p38, ERK, Akt и др.), които диференциално активират транскрипционни фактори (NF-kB, AP-1 и IRF), отговорни за експресията на различни провъзпалителни и антимикробни фактори. Освен това, всички TLR, с изключение на TLR3, предават сигнал към кинази, използвайки MyD88. TLR3 предава сигнал през TICAM1, а TLR4 през MyD88 и TICAM1 (фиг. 2).

Активирането на даден фактор се определя от вида на TLR, от който се предава сигналът. По този начин почти всички TLR (TLR2 и неговите корецептори - TLR1 и TLR6, както и TLR4-9, TLR11), чрез свързване към собствените си лиганди, са в състояние да активират NF-kB - един от основните фактори, регулиращи експресията на провъзпалителни цитокини като IL -1, -6, -8 и т.н. Активирането на друго семейство провъзпалителни транскрипционни фактори - IRF - се причинява от предаване на сигнал през TLR3, 4, 7-9. Сигналите, предавани чрез TLR3 или TLR4, водят до активиране на IRF3, който регулира експресията на IFN-ß и се счита за критичен компонент на антивирусните имунни отговори. Сигнализиране чрез TLR7-9 води до активиране на IRF5 и IRF7 и експресия на IFN-α, който също играе жизненоважна роля в антивирусната защита. Сигнализирането чрез TLR2 или TLR5 не води до активиране на фамилни фактори на IRF.

По този начин взаимодействието на определен тип TLR с неговия собствен лиганд инициира стартирането на сигнална каскада, което води до активиране

Таблица 1. Активиране на транскрипционни фактори NF-kB и IRF от различни ^Rs

^п TLR Активиране на NF-kB Активиране на IRF

TLR7++(IRF5, 7)

TLR8 + +(IRF5, 7)

TLR9 + +(IRF5, 7)

експресия на специфична комбинация от гени (цитокини, антимикробни молекули и др.).

Понастоящем обаче много за активирането на TLR-зависими сигнални пътища и развитието на последващи ефекти остава неясно. В наличната научна литература липсват данни, характеризиращи пълните транскриптомични и протеомни промени, които настъпват в отговор на активирането на някои TLR.

TLR И ТУМОРИ

Към днешна дата са описани фундаментално различни ефекти на TLRs върху тумори. От една страна, доказано е, че TLRs (и техните лиганди) могат да действат като супресори на туморния растеж; от друга страна, известно е, че TLRs могат да стимулират туморната прогресия и да повлияят на резистентността на туморите към химиотерапия. За да обясним тези противоречия, нека разгледаме подробно всеки случай.

ПРОТИВОТУМОРНА АКТИВНОСТ НА TLR

Много TLR агонисти в момента са в клинични изпитвания като противоракови средства (Таблица 2). Така естествените (ssRNA) и синтетичните (имиквимод) агонисти на TLR7 и 8 показват висока активност срещу хронична лимфоцитна левкемия и кожни тумори. Лигандът TLR9 - cpG, е способен да потиска растежа на лимфоми, тумори на мозъка, бъбреците и кожата. А лигандът TLR3 - поли(IC) има проапоптотичен ефект не само срещу туморни клетки, но и околните клетки (например ендотел).

Доказано е, че агонистите на TLR4 - LPS от грам-отрицателни бактерии и OK-432 (лекарство от стрептококи от група А) имат висока антитуморна активност при интратуморно приложение. Въпреки това, когато се прилагат системно, и двете лекарства (LPS и OK-432) не са имали способността да блокират туморния растеж. В момента лекарството OK-432 преминава втори етап на клинични изпитвания като средство срещу колоректални тумори

Ориз. 2. Сигнални пътища, идващи от Toll-подобни рецептори.

Плазмената мембрана

Ендозома

Извънклетъчен домен

Трансмембранен домейн

липопептид

и рак на белия дроб. Доказано е също, че OM-174, химически Ig2/4 агонист, е в състояние да потисне прогресията на меланома и да увеличи преживяемостта на експериментални животни, когато се прилага заедно с циклофосфамид. Тези експерименти разкриват, че агонистите на TLR2/4 индуцират TNF-α секреция и индуцируема експресия на PO синтаза. Както е известно, NO е способен да индуцира апоптоза в туморни клетки, резистентни на химиотерапия, и по този начин да увеличи продължителността на живота на мишките. Друго известно противотуморно лекарство от микробен произход, което активира Ig-зависимите реакции (TLR2, 4, 9) е BCG. Това лекарство се използва относително успешно при лечението на тумори на пикочния мехур повече от 30 години.

Таблица 2. TLR в клинични изпитвания

Като цяло, трябва да се отбележи, че различни TLR агонисти в момента са подложени на клинични изпитвания като средства срещу тумори от различен произход (Таблица 2).

Един от основните механизми на антитуморна активност на TLRs е способността им да стимулират развитието на тумор-специфичен имунен отговор. Така активирането на ^G:

1) стимулира (директно или косвено) миграцията на PC клетки, цитотоксични Т клетки и тип 1 Т помощни клетки в тумора, които причиняват лизиране на туморни клетки, използвайки различни ефекторни механизми (секреция на перфорини, гранзими, N-7 и др. .) ;

2) води до секреция тип I (NoP-a, c).

Злокачествено образувание

Късен стадий на недребноклетъчен рак на белия дроб I9

Етап IV меланом

Меланом III/c или стадий IV

Ненапълно резектабилен рак на панкреаса I2/6

Рецидив на неходжкинов лимфом

Рецидив на глиобластом

Хронична лимфобластна левкемия IG7

Таблица 3. Ефект на ^R върху развитието и растежа на тумора

Тумор стимулираща активност на TLR Антитуморна активност на TLR

Стимулиране на ангиогенезата 2, 9 Потискане на ангиогенезата 7, 9

Стимулиране на пролиферация 3, 4 Развитие на апоптоза 3, 4, 7, 9

Химиорезистентност 4 Повишена хемочувствителност 2, 4, 7

Активиране на регулаторни Т клетки (Treg) 4, 5 Инхибиране на Treg, представяне на антиген 4, 5, 7, 8, 9

Цитотоксичност 9

Друг вероятен механизъм за антитуморната активност на TLRs е възможността за TLR-зависим преход на тумор-стимулиращия тип макрофаги (M2) към тумор-супресиращия тип M1. Макрофагите от тип M2 се характеризират с експресията на цитокини като TGF-ß и IL-10, компоненти, необходими за възстановяване и ремоделиране на тъканите. TGF-ß стимулира пролиферацията на туморни клетки, IL-10 насочва развитието на имунния отговор към Th2, като по този начин блокира развитието на клетъчния противотуморен имунитет. Макрофагите тип M1, напротив, експресират IL-1, -6, -12, TNF-a, IFN-y и стимулират развитието на антитуморен клетъчен (Th1) имунен отговор.

ТУМОСТИМУЛИРАЩА АКТИВНОСТ НА TLR

Както е известно, хроничните инфекции и възпаления са най-важните фактори, стимулиращи развитието на злокачествени новообразувания. По-специално, ракът на стомаха може да бъде свързан с хронично възпаление, причинено от патоген като Helicobacter pylori, а хроничното възпаление на храносмилателния тракт често се свързва с развитието на рак на дебелото черво. Освен това е доказано, че употребата на нестероидни противовъзпалителни средства може да намали риска от развитие на някои видове злокачествени заболявания.

TLRs служат като ключова връзка във вродената имунна система на хора и животни; те участват в развитието на възпалителни реакции, когато клетките влязат в контакт с различни патогени. Ролята на TLRs в развитието и прогресията на тумори с различен произход в момента се изучава активно. TLR могат да бъдат включени в развитието и стимулирането на туморогенезата чрез няколко механизма (Таблица 3).

Един от най-важните фактори, определящи връзката между хроничното възпаление и образуването на тумор, е NF-kB. Този фактор е конститутивно активиран в повече от 90% от човешките тумори, включително остра и хронична миелоидна левкемия, рак на простатата, мултиплен миелом, злокачествен хепатом (рак на черния дроб) и др. . В това отношение агентите, способни да активират NF-kB, могат да бъдат пряко включени в процеса на развитие и прогресия на тумора. Както е известно, взаимодействието на патогени с TLR на клетъчната повърхност води до активиране на NF-kB и експресия на NF-kB-зависими гени, което определя участието на TLR в стимулирането на канцерогенезата. Активирането на NF-kB води до повишено производство на цитокини IL-1, IL-2, IL-6, IL-10, TNF-a; миграция на клетки на имунната система към мястото на възпаление в резултат на повишено производство на хемокини; “поддържане” на хронично възпаление; увеличаване на производството на антиапоптотични фактори и др. Тези свойства могат да осигурят оцеляване и прогресия на тумора чрез потискане на апоптозата и цитотоксичността, както и индуциране на ангиогенеза.

Вече е известно, че нивата на TLR са повишени в различни туморни клетки и мишките с нокаутирани TLR гени имат намалена честота на индуцируеми тумори. Освен това, увеличаването на експресията на TLR върху повърхността на туморните клетки на простатата или главата и шията може да стимулира тяхната пролиферация.

Хуанг и др. показват, че Listeria monocytogenes има директни стимулиращи тумора ефекти, свързани със способността му да активира TLR2-зависими сигнални пътища в ракови клетки на яйчниците. Освен това, TLR2-зависимото активиране на NF-kB, причинено от L. monocytogenes, води до повишена резистентност на туморните клетки към ефектите на химиотерапевтичните лекарства. Връзката на TLR2 с прогресията на тумора беше потвърдена в друго независимо проучване, в което Karin et al. са доказали ключовата роля на този рецептор при метастази на рак на белия дроб. Оказа се, че при мишки с нокаут на гена TLR2 метастазите и прогресията на туморите се случват много по-бавно, отколкото при мишки от див тип. Ключова роля в прогресирането на рака на белия дроб изиграха миелоидните клетки, които експресират TNF-a в отговор на тяхното стимулиране от версикан (екстрацелуларен матричен протеогликан, TLR2 лиганд, чието ниво е повишено в туморни клетки от много видове).

pov). Нашите проучвания също изследват ролята на TLR2 в прогресията на тумора. По-специално се оказа, че микоплазмената инфекция (Mycoplasma arginini) или добавянето на структурни компоненти (LAMB) на този патоген към клетки, експресиращи TLR2, води до потискане на апоптозата в тях, както и до повишен туморен растеж in vivo. По този начин е показано, че TLR могат да имат индиректен тумор-стимулиращ ефект чрез миелоидни клетки.

Подобни данни бяха получени за друг член на семейството TLR, TLR4. Системното (интравенозно) приложение на лиганда на този рецептор, LPS, стимулира миграцията на туморни клетки (аденокарцином на гърдата) и повишава тяхната инвазивност, а също така стимулира ангиогенезата в туморите. Подобни резултати са получени и при друг модел - интестинален аденокарцином: LPS увеличава преживяемостта на туморните клетки, стимулира тяхната пролиферация и при интраперитонеално приложение увеличава метастазите. Освен това Huang et al. показват, че туморните клетки, експресиращи TLR4, причиняват значително по-агресивен ход на заболяването (намален живот на животните) в сравнение с изогенните мишки, при които TLR4 е инактивиран от специфична siRNA. Получените данни предполагат, че прогресията на TLR4-позитивните тумори може да бъде повлияна от ендогенни лиганди (протеини на топлинен шок; β-дефензини; ендогенни LPS, освободени от червата), което отчасти напомня на ситуацията с тумор-стимулиращия ефект на TLR2 и неговия лиганд от ендогенен произход - версикан.

Въпреки това, данните, илюстриращи тумор-стимулиращия ефект на TLRs, не се ограничават до TLR2 и 4. Известно е, че повишената експресия на TLR5 и TLR9 върху цервикалните епителни клетки може да бъде свързана с прогресията на рака на шийката на матката. Високи нива на експресия на TLR9 са открити в клинични проби от рак на белия дроб и туморни клетъчни линии. В тези клетки стимулирането на TLR9 със специфични агонисти води до повишено производство на тумор-асоциирани цитокини. Нивата на TLR9 също са повишени на повърхността на човешки туморни клетки на простатата. Третирането на такива клетки с CpG олигодезоксинуклеотиди (ODN-CpG) или бактериална ДНК, които служат като лиганди за TLR9, повишава инвазията на туморни клетки. Повишената инвазия на туморни клетки в резултат на активиране на TLR9 може да се счита за нов механизъм, чрез който хроничните инфекции могат да стимулират растежа на туморните клетки на простатата.

Въпреки това, не само различни инфекциозни агенти и техните структурни компоненти имат способността да стимулират канцерогенезата чрез взаимодействие с TLR. Както е известно, DAMPs, ядрени и цитоплазмени протеини на клетки, които са претърпели некроза, също служат като лиганди за TLRs. DAMPs, освободени от увредени клетки, могат да бъдат разпознати от различни TLR на повърхността на имунните клетки и последващото активиране на TLR-зависими сигнали може да доведе до потискане на антитуморния имунен отговор и, като резултат, стимулиране на туморната прогресия.

Такива молекули с потенциални тумор-стимулиращи ефекти включват: протеини на топлинен шок (HSP60, 70), ATP и пикочна киселина, фамилията Ca2+-модулиращи протеини (S100), HMGB1 протеин и нуклеинови киселини, от които ДНК-свързващият протеин HMGB1 е най-добре проучено. Протеинът HMGB1, освободен в резултат на клетъчно увреждане, активира имунната система чрез взаимодействие с TLR. Клетъчните култури са показали, че протеинът HMGB1 стимулира растежа на ракови клетки на меланома, гърдата, дебелото черво, панкреаса и простатата. HMGB1 е способен да активира TLR2 и TLR4 върху туморни клетки и клетки на имунната система и, като следствие, да индуцира туморна прогресия и метастази.

Доказано е, че меланомните клетки имат повишена експресия на DAMPs като протеини от семейството S100, които могат да стимулират растежа както на самите меланомни клетки, така и на периферните кръвни лимфоцити, действайки като автокринен туморен растежен фактор. Протеинът S100A4, който служи като лиганд за TLRs, стимулира метастазите на раковите клетки на гърдата и повишената му експресия е индикатор за лоша прогноза. Въпреки връзката на S100A4 с метастази, този протеин може да се експресира от макрофаги, лимфоцити и фибробласти. Последните проучвания показват, че протеините S100A8 и S100A9, произведени от първичния тумор, са способни да активират серумен амилоид A (SAA) 3 в белодробната тъкан и по този начин да създадат условия за образуване на метастатична ниша. SAA3 служи като лиганд за TLR4 върху белодробни ендотелни клетки и макрофаги. Активирането на TLR4 улеснява миграцията на туморни клетки от първичната лезия в белодробната тъкан чрез създаване на микросреда, която насърчава туморния растеж. По този начин, потискането на сигналния път S100-TLR4 може ефективно да противодейства на образуването на белодробни метастази.

Обобщавайки описаните ефекти, можем да заключим, че TLR, от една страна, може пряко или косвено да участва в туморната про-

регресия, а от друга страна, повишават устойчивостта на туморните клетки към проапоптотични влияния.

Представените данни показват, че тумор-стимулиращите ефекти на TLR и техните лиганди имат сложен механизъм, който трябва да бъде изследван по-подробно. Все пак, въпреки сложността на този въпрос, могат да бъдат идентифицирани няколко ключови точки, които определят тумор-стимулиращия ефект на TLR:

1) взаимодействието на TLR със собствените му лиганди индуцира активиране на транскрипционния фактор NF-kB и, като следствие, увеличаване на производството на различни провъзпалителни цитокини (Ig-6, MCP-1, MNO, GR0a и др. .), както и редица антиапоптотични протеини, като по този начин насърчават директни или индиректни тумор-стимулиращи ефекти;

2) TLR-зависимото активиране на миелоидните клетки и техните прекурсори изглежда е определящ фактор при образуването на метастази. Серия от независими проучвания показват, че миелоидните клетки, мигриращи от костния мозък (в отговор на ендогенна стимулация) в тъканите, играят ключова роля в образуването на метастатични ниши. Тъй като е известно, че ендогенните (версикан, фибронектин и др.) и екзогенните (микробен произход) TLR лиганди са способни, от една страна, да стимулират миелоидните клетки и техните прекурсори, а от друга, да увеличат метастатичния потенциал на тумор, може да е много вероятно връзката между TLR-зависимото активиране на миелоидните клетки и последващото им участие в метастази;

3) активирането на TLR може да стимулира ангиогенезата чрез такива ангиогенни фактори като Ig-8, васкуларен ендотелен растежен фактор (VEGF) и матрични металопротеинази (MMP), както и да подобри адхезивните и инвазивни свойства на туморните клетки заедно с увеличаване на съдовата пропускливост.

ТОЛ-ПОДОБНИ РЕЦЕПТОРИ В ТЕРАПИЯТА НА ТУМОРИ

Поради способността на TLR агонистите да индуцират антитуморен имунен отговор чрез регулиране на функцията на клетките на имунната система, разположени в туморната микросреда, антитуморната терапия, базирана на доставянето на TLR лиганди до местата на туморен растеж, изглежда обещаваща. Пример за такава терапия е лекарството имиквимод, което съдържа TLR7 агонист. Това лекарство се използва за актинична кератоза и базалноклетъчен карцином. Проучва се и възможността за използване на това лекарство като адювант при лечението на меланом.

ние Друг TLR7 агонист, използван в туморната терапия, е лекарството 852A. В момента се разглежда възможността за използване на лекарството 852A при лечението на хронична лимфоидна левкемия и други солидни тумори. TLR9 агонист - 0DN-CpG, индуцира активиране и узряване на дендритни клетки, стимулира развитието на Т-клетъчен антитуморен отговор. Понастоящем се провеждат клинични изпитвания за безопасността и ефективността на TLR9 агонистите при лечението на рак на гърдата, дебелото черво, белия дроб, меланома, глиобластома и др. Макрофаг-активиращ липопептид-2 (MALP-

2), агонист на TLR2/6, показва окуражаващи резултати при лечението на рак на панкреаса: интратуморното приложение на MALP-2 заедно с гемцитабин по време на лапаротомия значително увеличава продължителността на живота на пациенти с ненапълно резектируем рак (от 9 до 17 месеца). Описаните примери за ефективно използване на TLR агонисти в туморната терапия показват обещанието за използване на тези лекарства, както и осъществимостта на по-нататъшни изследвания, насочени към създаване на противотуморни лекарства с подобен механизъм на действие.

Въпреки това, както беше посочено по-рано в този преглед, голям брой туморни клетки могат да експресират TLR на повърхността си и директното взаимодействие на такива клетки с TLR лиганди може да подобри прогресията на тумора, както и да го направи по-малко чувствителен към химиотерапевтични лекарства. По този начин има възможност постоянно циркулиращите в тялото TLR агонисти (патогенни микроорганизми, които могат да преодолеят имунната бариера; LPS на бактерии, които са част от нормалната чревна микрофлора, които могат да бъдат освободени в кръвния поток; техни собствени ендогенни лиганди). пряко или косвено допринасят за засилване на туморната прогресия.

В тази връзка, обещаваща посока в лечението на злокачествени новообразувания е използването на подходи, насочени към потискане на TLR-зависимите сигнални пътища. Вече известните подходи, използвани при лечението на злокачествени неоплазми, включват използването на NF-kB инхибитори.

Както е известно, конститутивно активиране на този фактор се наблюдава при такива видове тумори като: болест на Ходжкин, остра лимфобластна левкемия, мултиплен миелом, рак на гърдата, дебелото черво, белия дроб, яйчниците, простатата, различни видове лимфоми, рак на черния дроб, меланом и др. ..

За потискане на активността на NF-kB се използват няколко групи лекарства: нестероидни противовъзпалителни средства, които инхибират активността на 1KK и COX-2; естествени и бионалични 1KK инхибитори - флавоноиди, простагландини, BMS-345541, PS1145, SC-514 и SPC839; както и протеазомни инхибитори, които потискат активността на NF-kB чрез предотвратяване на разграждането на 1kB - бортезомиб (PS-341), иринотекан, гемцитабин и други лекарства, широко използвани при лечението на тумори на дебелото и тънкото черво, стомаха, панкреаса и т.н.

Тъй като факторът NF-kB е ключова връзка в TLR-зависимия сигнален път, използването на неговите инхибитори изглежда обещаващо за потискане на TLR-зависимата стимулация на туморния растеж.

Друга обещаваща цел, по наше мнение, може да са самите TLR. Тъй като TLR2 и TLR4 (рецептори, участващи в стимулирането на туморния растеж) се експресират на клетъчната повърхност, изглежда възможно да се използват специфични молекули (антитела, химични инхибитори), които потискат тяхната функционална активност. Към днешна дата са получени антитела, които блокират активността на TLR, но в наличната научна литература няма данни за тяхното клинично приложение.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

TLR са част от семейството на PRR. Ефектите, свързани с тяхното активиране, надхвърлят вродения имунен отговор. Участието в активирането на дендритни клетки, регулирането на специфични имунни реакции на ниво Т и В клетки, повишената експресия на IFN и др. определят участието на TLR във формирането на ефективен отговор на вродената и адаптивна имунна система при различни патогени навлизат в тялото или при поддържане на тъканната хомеостаза. Публикувани са резултатите от множество изследвания, според които лигандите към TLR могат да се използват като адюванти за имунотерапия на злокачествени новообразувания. Въпреки това е известно, че активирането на TLR на повърхността на туморните клетки може да доведе до повишена прогресия на тумори от различен произход.

Тази разлика в ефектите зависи основно от вида на използвания лиганд. Както е показано в табл. 1, TLR могат да бъдат разделени на две групи: индуциращи производството и неиндуциращи.Обикновено, когато се прилагат TLR3, 4, агонисти,

7, 8, 9, активиране на IRFs, се наблюдава потискане на туморния растеж. В същото време данни за противоракови

Холичното действие на агонистите на TLR2, което, за разлика от изброените рецептори (TLR3, 4, 7, 8, 9), не е в състояние да активира производството на тип I IFN, понастоящем отсъства. Друга характеристика, която обяснява разликите в ефектите на TLR агонистите върху туморите, е начинът на приложение. Интратуморното приложение на TLR3, 4, 7, 8, 9 лиганди в по-голямата част от случаите причинява смърт на туморни клетки и намаляване на размера на тумора. Най-вероятното обяснение за антитуморната активност на тези TLRs е тяхната способност, в отговор на взаимодействие с лиганд: а) да индуцират локална експресия на тип I и II IFNs, за които е известно, че причиняват смърт на туморни клетки; б) активират клетъчния имунитет. В този случай смъртта на туморните клетки, тяхната фагоцитоза и последващото представяне на тумор-специфични антигени определят допълнително стимулиране на специфичен антитуморен имунитет. Въпреки това, редица проучвания показват, че системното приложение на лиганди към TLR4, напротив, често се свързва със стимулиране на туморния растеж. Според нас тази разлика се дължи на факта, че интратуморните инжекции на лиганда TLR4 (LPS) причиняват значително по-голямо натрупване на IFN директно в туморите, отколкото при системно приложение на лиганда. Тъй като IFN са ефекторни протеини на късо разстояние, които действат при доста високи концентрации, тяхното производство извън тумора (когато се прилага системно) не води до смърт на туморни клетки и следователно до развитие на противотуморен имунитет. В този случай провъзпалителните цитокини и хемокини, индуцирани след локално или системно приложение на LPS, могат да играят двойна роля: при интратуморно приложение на LPS, насърчаване на развитието на антитуморен имунитет и при системно приложение - при липса на цели за имунната система. система – имат положителен ефект върху растежа на тумора, стабилността на неговите клетки и техния метастазен потенциал.

По този начин наличните данни показват двоен ефект на TLR агонистите върху туморния растеж. Това двойно влияние на TLR предполага по-сложна функционална роля на TLR в туморната биология. Ясно е, че такава роля за TLR надхвърля простото активиране на NF-κB. Изследването на ефекта на различни TLR лиганди върху тумори изисква вземане под внимание на много фактори, включително нивото на TLR експресия; вида на тъканта, от която произлиза туморът; туморна микросреда и много други. Систематичното изследване на функциите и ролята на TLR върху туморните клетки може да допринесе значително за разработването на нови противотуморни средства с TLR-зависим механизъм на действие.

CnMCOK.HMTEPATYPH

1. Coussens L.M., Werb Z. // Nature. 2002. V. 420 (6917). С. 860-867.

2. Mantovani A., Allavena P., Sica A., Balkwill F. // Nature. 2008. V. 454 (7203). С. 436-444.

3. Окамото Т. // Endocr. Metab. Имунно разстройство. Лекарство. Цели.

2006. Т. 6(4). С. 359-372

4. Томас Х. Г., Хан Дж. Х., Балентиен Е. и др. // Методи Enzy-mol. 1991. В. 198. С. 373-383.

5. Kleeff J., Kusama T., Rossi D.L. // Междун. J. Рак. 1999. V. 81.

6. Deveraux Q.L., Schendel S.L., Reed J.C. // Кардиол. Clin. 2001 г.

V. 19 (1). С. 57-74.

7. Dong Z., Wang J.Z., Yu F., Venkatachalam M.A. //Am. J. Pathol. 2003. V. 163 (2). С. 663-671.

8. Bartsch H., Nair J. // Langenbecks Arch. Surg. 2006 г.

V. 391 (5). С. 499-510.

9. Мозер Б., Вилиман К. // Ann. Rheum. дис. 2004. V. 63 Suppl 2. P. 84-89.

10. Rasmussen S.B., Reinert L.S., Paludan S.R. // APMIS. 2009. V. 117 (5-6). С. 323-337.

11. Palm N.W., Medzhitov R. // Immunol. Rev. 2009. V. 227 (1).

12. Zeromski J., Mozer-Lisewska I., Kaczmarek M. // Cancer Microenviron. 2008. Т. 1(1). P 37-42.

13. Jego G., Bataille R., Geffroy-Luseau A. и др. //

левкемия 2006. V. 20 (6). P 1130-1137.

14. Seya T., Akazawa T., Uehori J. и др. // Anticancer Res.

2003. V. 23(6a). P. 4369-4376.

15. Grauer O.M., Molling J.W., Bennink E., et al. // J. Immunol. 2008. Т. 15. С. 6720-6729.

16. Меджитов Р. // Нац. Rev. Immunol. 2001. Т. 1(2). P 135-145.

17. Пасаре Ч., Меджитов Р. // Природа. 2005. V. 438 (7066).

18. Заслоф М. // Природа. 2002. V. 415 (6870). С. 389-395.

19. Дойл С.Е., О'Конъл Р.М., Миранда Г.А. и др. // J. Exp. Med. 2004. Т. 5. С. 81-90.

20. Werling D., Hope J.C., Howard C.J., Jungi T.W. // Имунология. 2004. V. 111 (1). P 41-52.

21. Nijhuis M.M., Pasterkamp G., Sluis N.I., et al. // J. Vasc. Рез. 2007. V. 44 (3). P 214-222.

22. Kaisho T., Akira S. // J. Allergy Clin. Immunol. 2006 г.

V. 117 (5). P 979-988.

23. Salaun B., Romero P, Lebecque S. // Eur. J. Immunol. 2007. V. 37 (12). P. 3311-3318.

24. Ивазаки А., Меджитов Р. // Нац. Immunol. 2004. Т. 5(10).

25. Пасаре Ч., Меджитов Р. // Адв. Exp. Med. Biol. 2005. V. 560.

26. Li M., Zhou Y., Feng G., Su S.B. //Curr. Mol. Med. 2009. Т. 9(3).

27. Къртис Л.К., Тобиас П.С. // J. Lipid. Рез. 2009. Т. 50 Доп.

28. Krieg A.M. // J. Clin. Инвестирам. 2007. Т. 117. С. 1184-1194.

29. Chicoine M.R., Zahner M., Won E.K. // Неврохирургия. 2007 г.

Т. 60. С. 372-381.

30. Harmey J.H., Bucana C.D., Lu W. // Int. J. Рак. 2002 г.

Т. 101. С. 415-422.

31. Huang B., Zhao J., Shen S. // Рак. Рез. 2007. Т. 67.

32. Средства T.K., Golenbock D.T., Fenton M.J. // Life Sci. 2000. Т. 8. С. 241-258.

33. Diebold S.S. //Handb. Exp. Pharmacol. 2009. Т. 188. С. 3-30.

34. West A.P., Koblansky A.A., Ghosh S.// Annu Rev. клетка. Dev. Biol.

2006. Т. 22. С. 409-437.

35. Zhang Z., Schluesener H.J. // Cell Mol. Life Sci. 2006. V. 63 (24).

36. O'Neill L.A., Bowie A.G. //Nat. Rev. Immunol. 2007. Т. 7(5).

37. Stockfleth E., Trefzer U., Garcia-Bartels C. // Br. J. Dermatol. 2003. V. 149 (Допълнение 66). P 53-56.

38. Nogueras S., Merino A., Ojeda R. // Heart. Circ. Physiol.

2008. V. 294. P 708-713.

39. Окамото М., Ошикава Т., Тано Т. и др. // J. Immunother.

2006. Т. 29. С. 78-86.

40. D'Agostini C., Pica F., Febbraro G. и др. // Междун.

Имунофармакол. 2005. Т. 5(7-8). С. 1205-1212.

41. Моралес А., Айдингер Д., Брус А.В. // J. Urol. 1976. Т. 116.

42. Street S.E., Cretney E., Smyth M.J. // Кръв. 2001. Т. 1; 97 (1).

43. Swann J.B., Hayakawa Y., Zerafa N., et al. // J. Immunol. 2007 г.

V. 15; 178 (12). P. 7540-7549.

45. Balkwill F., Coussens L.M. //Природа. 2004. Т. 431. С. 405-406.

46. ​​​​Robak P., Smolewski P., Robak T. // Leuk. Лимфом. 2008. V. 49. P 1452-1462.

47. Pikarsky E., Porat R.M., Stein I., et al. //Природа. 2004. В. 431. С. 461-466.

48. Palayoor S.T., Youmell M.Y., Calderwood S.K., et al. //Онкоген. 1999. V. 18. P 7389-7394.

49. Griffin J.D. // Кръв. 2001. Т. 98. С. 2291.

50. Филип М., Роули Д.А., Шрайбер Х. // Semin. Cancer Biol.

2004. V. 14. P 433-439.

51. Swann J.B., Vesely M.D., Silva A., et al. //Процес. Natl. акад. Sci. САЩ. 2008. Т. 105. С. 652-656.

52. Щебляков Д.В., Логунов Д.Ю., Зубкова О.В. и други // Mol. генетика, микробиол. и вирусол. 2008. № 4. С. 6-9.

53. Логунов Д., Шебляков Д., Зубкова О. и др. //Онкоген. 2008. Т. 27. С. 4521-4531.

54. Ким С., Такахаши Х., Лин У.В. и др. //Природа. 2009. Т. 457. С. 102-106.

55. Luo J.L., Maeda S., Hsu LC., et al. // Ракова клетка. 2004. Т. 6.

56. Huang B., Zhao J., Li H. // Cancer Res. 2005. V. 65. P 50095014.

57. Kim W.Y., Lee J.W., Choi J.J., et al. // Междун. J. Gynecol. Рак. 2008. V. 18. P 300-305.

58. Droemann D., Albrecht D., Gerdes J., et al. // Respir. Рез.

2005. Т. 6. С. 1-6.

59. Ilvesaro J.M., Merrell M.A., Swain T.M., et al. //Простата.

2007. Т. 67. С. 774-781.

60. Lotze M.T., Zeh H.J., Rubartelli A., et al. // Immunol. Rev.

2007. Т. 220. С. 60-81.

61. Ellerman JE, Brown CK, Vera M. и др. // Clin. Cancer Res.

2008. Т. 13. С. 2836-2848.

62. Cabezon T., Celis J.E., Skibshoj I., et al. // Междун. J. Рак. 2007. Т. 121. С. 1433-1444

63. Адамс С., О'Нийл Д.У., Нонака Д. и др. // J. Immunol. 2008. В. 181. С. 776-784.

64. Spaner D.E., Miller R.L., Mena J. и др. //Leuk. Лимфом. 2005. Т. 46. С. 935-939.

65. Дудек А.З., Юнис К., Харисън Л.И. и др. // Clin. Cancer Res.

2007. Т. 13. С. 7119-7125.

66. Schmidt J., Welsch T., Jäger D., et al. // Br. J. Рак. 2007 г.

Т. 97. С. 598-604.

67. Карин М., Ямамото Ю., Уанг К.М. //Nat. Rev. Лекарство. 2004. Т. 3. С. 17-26.