УДК 579.842.23+ 616-092.19

Т.П. Старовойтова, Т.А. Иванова, Г.Б. Мухтургин, С.А. Витязева, В.И. Дубровина,

К.М. Корытов, С.В. Балахонов

ИЗМЕНЕНИЯ КЛЕТОЧНОГО СОСТАВА ПЕРИТОНЕАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ БЕЛЫХ МЫШЕЙ ПРИ ИНФЕКЦИОННОМ ПРОЦЕССЕ, ВЫЗВАННОМ YERSINIA PESTIS C РАЗЛИЧНЫМ ПЛАЗМИДНЫМ СОСТАВОМ

Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока (Иркутск)

В статье представлены данные о влиянии плазмидного состава чумного микроба на субпопуляционный состав мононуклеарных клеток перитонеальной жидкости белых мышей на ранних сроках инфекционного процесса. Показано, что изменение клеточного состава перитонеальной жидкости экспериментальных животных зависит от плазмидного профиля штаммов чумного микроба. В ходе эксперимента также выявлена фазность в изменении количественного состава тучных клеток перитонеальной жидкости белых мышей, инфицированных штаммами Yersinia pestis с разным плазмидным спектром. Ключевые слова: Yersinia pestis, перитонеальная жидкость, вирулентность

CHANGES IN CELLULAR COMPONENTS OF PERITONEAL FLUID OF WHITE MICE WITH INFECTION CAUSED BY YERSINIA PESTIS WITH DIFFERENT PLASMID PROFILE

T.P. Starovoytova, T.A. Ivanova, G.B. Mukhturgin, S.A. Vityazeva, V.I. Dubrovina,

K.M. Korytov, S.V. Balakhonov

Irkutsk Antiplague Research Institute of Siberia and Far East, Irkutsk

The article presents the data on the influence of Yersinia pestis plasmid profile on subpopulation structure of mononuclear cells of peritoneal fluid of mice at the early stages of infectious process. It was showed that change of cellular composition of peritoneal fluid of the experimental animals depended on the plasmid profile of Yersinia pestis strains. The phase character in the changes of quantitative composition of the mast cells of peritoneal fluid of white mice infected with Y. pestis strains with different plasmid spectrum was determined. Key words: Yersinia pestis, peritoneal fluid, virulence

Подавляющее большинство факторов вирулентности Yersinia pestis связаны с плазмидным составом. Геном возбудителя чумы основного подвида - Yersinia pestis subspecies pestis - имеет три плазмиды - рУУ(45МДа), pYP(6M№) и рYТ(61МДа), их роль хорошо изучена в реализации патогенных свойств иерсиний. С наличием плазмиды pYV штаммы иерсиний проявляют многие фенотипические признаки: клеточную адгезию, ау-тоагглютинацию, поверхностную агглютинацию, а также синтез белков наружной мембраны, в том числе V- и W-антигенов и других белков, действие которых направлено на подавление фагоцитарной активности клеток иммунной системы. Плазмиды рYPи рYТ ви-доспецифичны. Плазмида рYP детерминирует синтез бактериоцина пестицина 1 и активатора плазмино-гена, а плазмида рYТ кодирует два наиболее хорошо изученных фактора вирулентности - мышиный токсин и F1 капсулы . Отличительным признаком возбудителя, циркулирующего в Тувинском очаге, является наличие в его геноме дополнительной четвертой плазмиды рТРЗЗ с пока невыясненными функциями. Предполагают, что данная плазмида представляет собой генетически модифицированный вариант резидентной плазмиды 9,5 kD, несущей гены pla (активатор плазминогена) и pstl (пестицин 1) . Утратаплазмид приводит к изменению биохимических, культуральных свойств, а также к снижению или полной утрате вирулентности возбудителя .

Ведущим клиническим признаком чумной инфекции и интоксикации, определяющим тяжесть течения

и исход заболевания, является нарушение гомеостаза макроорганизма. Первичными мишенями для эндотоксина являются полиморфноядерные лейкоциты, макрофаги, моноциты, клетки эндотелия и другие клеточные элементы. Изменение клеточного состава перитонеальной жидкости можно расценивать как диагностический критерий тяжести болезни при многих заболеваниях, в том числе и при чуме. В связи с этим оценка количественного и качественного клеточного состава перитонеальной жидкости у белых мышей при инфекционном процессе, вызванном Y. pestis с различным плазмидным составом, представляет большой интерес.

Цель работы: исследовать динамику изменения субпопуляционного состава мононуклеарных клеток перитонеальной жидкости белых мышей на ранних сроках экспериментальной чумной инфекции.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Экспериментальной моделью в опытах служили 175 беспородных, но стандартных по условиям содержания и весу (18-20 г) белых мышей обоих полов. Животных выводили из эксперимента в соответствии с «Правилами лабораторной практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ № 267 от 19.06.2003 г., и Национальным стандартом РФ ГОСТ Р 53434-2009 «Принципы надлежащей лабораторной практики».

В работе использовали 6 штаммов Y. pestis subsp. pestis и Y. pestis subsp. altaica из коллекции музея Ир-

Таблица 1

Характеристика тестируемых штаммов чумного микроба

Штамм Место выделения Плазмидный состав Вирулентность для белых мышей ^Обо), м. к.

Y. pestis subsp. pestis И-2638 Тувинский природный очаг чумы pYP+pYV+pTP33+pYT+ 10 / высоковирулентный

Y. pestis subsp. pestis И-3479 Иркутский противочумный институт pYP+pYV-pTP33+pYT+ авирулентен

Y. pestis subsp. pestis И-3480 Иркутский противочумный институт pYP-pYV-pTP33+pYT+ авирулентен

Y. pestis subsp. altaica И-2359 Горно-алтайский природный очаг чумы pYP+pYV+pYT+ 4 х 104/слабовирулентный

Y. pestis subsp. altaica И-2948 Горно-алтайский природный очаг чумы pYP-pYV+pYT+ 3 х 108/остаточная вирулентность

Y. pestis subsp. altaica И-2948/3 Иркутский противочумный институт pYP-pYV-pYT+ авирулентен

кутского научно-исследовательского противочумного института Роспотребнадзора (табл. 1).

Интактные белые мыши были разделены на 6 опытных и 1 контрольную группы по 25 особей в каждой. Животных опытных групп заражали Y. pestis в концентрации 1 х 106 м. к. в объеме 0,5 мл интрапе-ритонеальным способом. I опытной группе животных вводили выращенную при температуре 28 °С двухсуточную культуру Y. pestis subsp. pestis И-2638, II группе - Y. pestis subsp. pestis И-3479, III группе - Y. pestis subsp. pestis И-3480, IV опытную группу животных заражали референтным Горно-Алтайским штаммом Y pestis subsp. altaica И-2359, V группу - Y. pestis subsp. altaica И-2948, VI группу - селекционным штаммом Y. pestis subsp. altaica И-2948/3.

Забор материала от экспериментальных животных (перитонеальная жидкость) производили через 30, 60, 90, 120 и 180 минут. Проводили подсчет общего числа ядерных клеток в 1 мл перитонеальной жидкости в фиксированных препаратах, окрашенных стандартными методами . Для бактериологического анализа кровь из сердца и перитонеальную жидкость (по 0,1 мл) засевали на твердую питательную среду (агар Хоттингера, рН 7.2).

В работе использовали методы обзорной микроскопии. Количественную оценку общего числа лейкоцитов проводили с использованием унифицированного метода подсчета клеток в камере Горяева. Процентное соотношение различных видов лейкоцитов проводили методом морфологического исследования перитонеальной жидкости в мазках. При исследовании препаратов с использованием компьютерной программы «MoticImagesPlus» (версия 2) осуществляли дифференцированный подсчет тканевых базофилов (ТК), измеряли их диаметр и площадь. Степень активизации ТК оценивали по индексу дегрануляции клеток (ИДТК) - процентное соотношение дегранули-рованных тучных базофилов к их общему числу .

Автоматический анализ изображения производили с помощью светового микроскопа «Zeiss» (Германия) с видеокамерой «Moticam 2000», разрешение 1392 х 1040 пикселей, ок. 10, об. 100.

Значимость результатов исследования получали математическими методами статистической обработки с применением сравнительного анализа по t-критерию Стьюдента и с применением компьютерной программы Statistica, версия 6.0 (StatSoft Inc. 19842001, ИПЧИ 31415926535897) и пакета программ

Microsoft Office Excel (2003). Результаты считали значимыми по отношению к контролю при р < 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Общее количество клеток в перитонеальной жидкости у интактных животных составляет 4,3 ± 0,9 х 103 в 1 см3, при этом макрофаги являются преобладающим клеточным типом и составляют 60,5 ± 5,6 % от общего числа клеток, а на долю лимфоцитов приходится 17,0 ± 2,8 %; 5,5 ± 0,8 % составляют клетки мезотелия и другие клеточные элементы.

У инфицированных белых мышей наблюдается фазность в изменении общего количества ядерных клеток. У животных, зараженных вирулентным штаммом Y. pestis subsp. pestis И-2638, через 30 мин общее число ядерных клеток резко возрастает до 1,5 ± 0,4 х 104 в 1 см3, что превышает показатели у интактных животных в 3,4 раза. К 60 мин исследования показатели снижаются до интактных значений, продолжая уменьшаться в последующие сроки. Цитологическая картина перитонеальной жидкости имеет четкую взаимосвязь с заражающей культурой. У животных I группы через 30 мин после инфицирования отмечено увеличение количества лимфоцитов, превосходящее значение у интактных животных в 4 раза за счет резкого снижения числа моноцитов. Данные изменения выявлены во все сроки наблюдения. В перитонеальной жидкости белых мышей, инфицированных Y. pestis subsp. pestis И-2638, через 120 мин от начала эксперимента зарегистрировано увеличение количества сегментоядерных нейтрофилов в 2,5 раза, по сравнению с контролем (р < 0,05), и незначительное увеличение количества палочкоядерных нейтрофилов. На последнем сроке исследования в мазках перитонеальной жидкости выявляется большое количество фибробластов, агрегация лимфоцитов и большое количество делящихся клеток.

У белых мышей, зараженных Y. pestis subsp. altaica И-2359, Y. pestis subsp. pestis И-3479 и Y. pestis subsp. altaica И-2948/3, через 30 мин после начала эксперимента статистически значимые изменения отсутствуют. К 180 мин количество ядерных клеток в перитонеаль-ном экссудате превосходит показатели в контроле в 2,8 (р < 0,01), 1,9 (р < 0,05) и 1,5 раза соответственно. При введении животным Y. pestis subsp. pestis И-3480 и Y. pestis subsp. altaica И-2948 через 30 мин отмечается повышение общего числа ядерных клеток с последующим снижением (120 мин) до уровня контроля, и к 180 мин показатель вновь увеличивается.

При просмотре мазков перитонеальной жидкости у животных всех опытных групп регистрируется клеточная пролиферация лимфоцитов, гистиоцитов, увеличение эозинофилов, тканевых базофилов, плаз-моцитов, клеток мезотелия и фибробластов.

Оценка морфологических свойств базофилов, их количество и функциональная активность представляют интерес при исследовании клеточного состава пе-ритонеальной жидкости инфицированных животных.

Установлено, что у опытных белых мышей отмечается фазность в изменении количественного состава тканевых базофилов перитонеальной жидкости. Увеличение их числа у животных, зараженных Y. pestis subsp. pestis И-2638, регистрируется в 60 мин после введения культуры, превышая значения у ин-тактных животных в 2,6 раза (р < 0,05). Затем данные показатели снижаются (90-120 мин) до значений ин-тактных животных, к 180 мин вновь возрастают, достигая значений 8,5 против 2,5 в контроле (р < 0,05). Часть ТК представлены интестинальными - незрелыми формами (рис. 1), появление которых можно расценивать как процесс компенсации.

Рис. 1. Белая мышь, зараженная Y. pestis subsp. pestis И-2638. Перитонеальная жидкость. Интестинальные тучные клетки. Окраска по Романовскому - Гимзе, ув. х 100.

В первые сроки исследования атипичные ТК составляют 21,0 ± 1,8 % от общего числа ТК, к последним срокам данные показатели возрастают до 25,2 ± 2,1 %. Атипичные ТК обладают минимальным функциональным потенциалом и имеют значительно меньшие размеры. Диаметр клеток составляет 6,8-8,6 мкм, что в среднем в 2,3 раза меньше (р < 0,05), по сравнению с диаметром типичных ТК. Таких клеток значительно меньше в перитонеальной жидкости белых мышей, зараженных Y. pestis subsp. altaica И-2359, и только в период 120-180 мин после заражения отмечаются единичные интестинальные тканевые базофилы. У животных других опытных групп атипичные ТК не выявляются.

В целом активизация системы ТК отражает общую адаптивную перестройку организма в ответ на введение антигена. Дегрануляция тканевых базофилов проходит по пути цельногранулярного экзоцитоза (рис. 2). Функциональная активность тканевых базофилов перитонеальной жидкости опытных животных имеет фазный характер. Самый высокий ИДТК отмечается

у белых мышей через 60 мин после заражения Y. pestis subsp. pestis И-2638 - 3,9 ± 0,6, что в 18,5 раза (р < 0,01) выше значения у интактных животных, затем показатель резко снижается, но к 180 мин исследований он вновь повышается, превышая значение в контрольной группе в 4,4 раза (р < 0,01). У селекционных клонов Y. pestis subsp. pestis И-3479 и И-3480 максимальное значение индекса дегрануляции имеет место через 90 мин от начала опыта и составляет 2,0 ± 0,3 и 1,3 ± 0,4 соответственно, при этом у белых мышей II опытной группы показатели во все сроки исследования были выше, чем у животных III опытной группы.

Рис. 2. Белая мышь, зараженная Y. pestis subsp. pestis И-2638. Перитонеальная жидкость. Тучные клетки. Дегрануляция. Окраска по Романовскому - Гимзе, ув. х 100.

Наиболее выраженный фазный характер изменения тканевых базофилов отмечается у белых мышей IV опытной группы. Максимальное значение ИДТК приходится на второй и четвертый этапы исследования, превышая значения интактных животных в 5,8 и 7,4 раза (р < 0,05) соответственно. У особей, зараженных Y. pestis subsp. altaica И-2948/3, только на двух сроках исследования (60-90 мин) регистрируется увеличение дегрануляции тучных клеток в 3,6 и 2,6 раза соответственно (р < 0,05), в другие сроки данные статистически не значимы. У белых мышей V опытной группы максимальное значение ИДТК приходится на второй и последний срок исследования - 0,99 и 0,92 у. е., при в контроле отмечается 0,21 у. е.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, развитие инфекционного процесса в первые часы после инокуляции возбудителя чумы зависит от его плазмидного профиля, поскольку наиболее выраженные изменения количественного и качественного клеточного состава перитонеальной жидкости выявлены у экспериментальных животных при заражении штаммами с наличием pYP+pYV+pYT+.

Выявленная в ходе эксперимента фазность в изменении количественного состава тучных клеток перитонеальной жидкости, особенно у особей, зараженных вирулентным штаммом Y. pestis subsp. pestis И-2638 (pYP+pYV+pTP33+pYT+), а также наличие незрелых и атипичных форм ТК свидетельствует о развитии процессов компенсации.

В целом активизация системы тучных клеток отражает общую адаптивную перестройку организма в ответ на введение антигена.

ЛИТЕРАТУРА REFERENCES

1. Анисимов А.Н. Факторы Ypestis, обеспечивающие циркуляцию и сохранение возбудителя чумы в экосистемах природных очагов. Сообщение 1 // Молекулярная генетика, микробиол. и вирусол. - 2002. - № 3. - С. 3-23.

Anisimov A.N. Factors of Y. pestis providing circulation and preserving of plague infectious agent in the ecosystems of natural foci. Report I // Molekuljarnaja genetika, mikrobiol. i virusol. - 2002. - N 3. - P. 3-23. (in Russian)

2. Балахонов С.В. Обнаружение нуклеотидных последовательностей генов pla, pstl и cafl на криптической плазмиде 33 kd штаммов Yersiniapestis из тувинского очага чумы // 8th Int. Symp. on Yersinia. -Турку, Финляндия, 2002. - № 10. - С. 352-355.

Balakhonov S.V. Detection of pla, pstl and cafl gene nucleotide sequences in cryptic plasmid 33 kb Yersinia pestis strains from Tuva plague focus // 8th Int. Symp. on Yersinia. - Turku, Finland, 2002. - N 10. - P. 352-355. (in Russian)

3. Витязева С.А., Старовойтова Т.П., Бушкова А.В. Тканевые базофилы как представители многочисленной клеточной популяции АПУД-системы. - Деп. в ВИНИТИ № 376-В2010 17.06.2010. - 18 с.

Vityazeva S.A., Starovoytova T.P., Bushkova A.V. Tissue basophiles as the representatives of numerous cell population of APUD-system. - Dep. in VINITI N 376-В2010 17.06.2010. - 18 p. (in Russian)

4. Красноженов Е.П., Федоров Ю.В. Влияние инфекционного процесса на морфофункциональную характеристику тканевых базофилов // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунол. - 1996. - № 1. - С. 107-108.

Krasnozhenov E.P., Fedorov Yu.V. Influence of infectious process on morphofunctional characteristics

of tissue basophiles // Zhurn. mikrobiol., jepidemiol. i immunol. - 1996. - N 1. - P. 107-108. (in Russian)

5. Лебедева С.А., Трухачев А.Л., Иванова В.С., Арутюнов Ю.И. и др. Вариабельность возбудителя чумы и проблемы его диагностики / Под ред. С.А. Лебедевой. - Ростов-на-Дону: Антей, 2009. - 533 с.

Lebedeva S.A., Trukhachev A.L., Ivanova V.S., Arutyunov Yu.I. et al. Diversity of plague infectious agent and problems of its diagnostics / Ed. by S.A. Lebedeva. -Rostov-on-Don: Antei, 2009. - 533 p. (in Russian)

6. Меньшиков В.В. и др. Лабораторные методы исследования в клинике. - М.: Медицина, 1987. - 365 с.

Menshikov V.V. et al. Laboratory methods of research in clinic. - Moscow: Medicina, 1987. - 365 p. (in Russian)

Перитонеальная жидкость – это смазочная жидкость (вырабатываемая и поглощаемая брюшиной), находящаяся в брюшной полости. Брюшная полость это пространство между абдоминальными органами (например, желудком, селезенкой, печенью и желчным пузырем) и мембраной, выстилающей стенки живота.

Перитониальная жидкость – прозрачная, стерильная жидкость, состоящая в основном из воды и небольшого количества лейкоцитов, антител, электролитов и других биохимических веществ. Основной функцией перитониальной жидкости является уменьшение трения, вызываемого движением органов брюшной полости.

Причины проведения анализа

У здоровых людей в брюшной полости содержится небольшое количество перитониальной жидкости. Но определенные проблемы могут привести к ее избыточному накоплению. Эта жидкость, которую также называют асцитической, может привести к состоянию, называемому асцит. Это одно из осложнений, вызываемых циррозом.

Некоторые инфекции и микроорганизмы также могут вызывать перитонит – воспаление перитониальной мембраны.

В таком случае проводится посев перитониальной жидкости. Он нужен для того, чтобы диагностировать проблему и начать лечение.

Посев перитонеальной жидкости

Это лабораторный тест, во время которого из брюшной полости берется проба жидкости, исследуемой затем на микроорганизмы, бактерии и грибки, способные вызвать инфицирование.

Процедура

Из брюшной полости извлекут немного перитониальной жидкости, которую затем направят в лабораторию, где проведут посев и окраску по граму. Процедура взятия образца называется .

Подготовка

Перед началом лапароцентеза необходимо опорожнить мочевой пузырь.

Место прокола очистят антисептиком.

Обезболят (с помощью ​​местной анестезии).

Вставят иглу (или тракар с конюлей, для чего могут сделать небольшой разрез) и извлекут образец жидкости.

При извлечении большого объема жидкости, пациент можете почувствовать слабое головокружение.

Риски, связанные с процедурой

Существует небольшой риск того, что игла проколет мочевой пузырь, кишечник или кровеносный сосуд. Это может привести к перфорации и кровотечению, или инфицированию кишечника.

Рак яичников и шейки матки являются главными видами рака, приводящего к смерти женщин. Коварство этих болезней в том, что часто они никак себя не проявляют или имеют слабо выраженные симптомы. Из-за этого, опухоль может вырасти до серьезных размеров, прежде чем ее обнаружат. Цитологическое исследование перитонеальной жидкости может быть очень полезным при обнаружении раковых клеток или других генетических аномалий яичников и шейки матки на ранней стадии.

Исследование жидкостей организма охватывает несколько аналитических дисциплин. Оно включает подсчет и дифференциацию клеток и прочих частиц. Подсчет и дифференциация клеток в различных жидкостях организма, например, в спинномозговой, серозной и синовиальной жидкости, возможны с помощью наших анализаторов серии XN и некоторых анализаторов Х-класса. Подсчет и дифференциация клеток в жидкостях организма является важным аспектом процесса постановки правильного диагноза. Проведение такого анализа может потребоваться по разным причинам, которые зависят сугубо от типа жидкости организма.

Автоматизация данных манипуляций с жидкостями организма имеет ряд преимуществ по сравнению с ручными методами, которые предусматривают использование традиционной счетной камеры. Это быстро и удобно. При этом качество анализа не зависит от субъективного уровня подготовки сотрудника, в связи с чем этот метод обеспечивает стандартизацию процедуры дифференцированного подсчета. Кроме того, сокращается количество отнимающих много времени подсчетов вручную в счетной камере.

Поскольку клетки в жидкостях организма, особенно нейтрофилы, деградируют быстро, пробу необходимо подвергнуть анализу как можно быстрее.

Спинномозговая жидкость (СМЖ)

Спинномозговая жидкость представляет собой прозрачную жидкость организма в виде физиологического раствора с низким содержанием протеина вследствие ультрафильтрации крови. Она заполняет пространство между черепом, мозгом и желудочками и окружает спинной мозг. СМЖ служит в качестве «амортизатора» для головного и спинного мозга, переносит гормоны и нейромедиаторы, помогает в удалении токсичных метаболитов и обеспечивает постоянную среду для мозга. В организме здорового взрослого человека содержится от 100 до 150 мл этой жидкости, а уровень ежедневной продукции обычно составляет около 500 мл.

Клеточный анализ спинномозговой жидкости необходим для выявления или исключения заболеваний, поражающих центральную нервную систему: инфекции, вызванной бактериями, вирусами, грибками или простейшими организмами; воспаления (например, рассеянный склероз или острый идиопатический полиневрит); менингита (например, клетки из периферийных новообразований).

Забор проб в основном происходит посредством люмбальной пункции, реже – путем цистернальной пункции. У пациентов с вентрикулярным шунтом, например, после хирургического вмешательства или во время лечения гидроцефалии, пробы также могут быть получены из шунта. Забор спинномозговой жидкости является повседневной процедурой, но все же несет некоторые риски, в связи с чем СМЖ является ценным материалом.

Плевральная жидкость

Плевральная жидкость аккумулируется между двумя плевральными слоями – в пространстве вокруг легких, известном как плевральная полость. В нормальном состоянии организма объем плевральной жидкости не превышает 10 мл. Избыточное количество данной жидкости (плевральный выпот) считается патологией. Для такого состояния существуют различные причины, от острой сердечной недостаточности (наиболее распространенная причина) до пневмонии, эмболии легких, туберкулеза и т. д.

Подсчет и дифференциация клеток плевральной жидкости производится для определения причины плеврального выпота и выявления или исключения инфицирования легких или плевры бактериями, вирусами или простейшими организмами. Высокая концентрация нейтрофилов, например, предполагает наличие инфекции, однако даже неинфекционный плевральный выпот может содержать значительное количество лейкоцитов, хотя в данном случае может быть больше мононуклеарных клеток. Кроме того, постоянно встречаются мезотелиальные клетки, а при онкологическом заболевании могут быть обнаружены раковые клетки. Если жидкость кровянистая, это зачастую является следствием опухолевой инвазии.

Перитонеальная жидкость

Как и плевральная жидкость, перитонеальная жидкость считается патологической при превышении определенного объема, обычно 10 мл. Перитонеальная жидкость скапливается в брюшной полости. Если данная жидкость аккумулируется в избыточном объеме, такое состояние известно как асцит. В большинстве случаев асцит является следствием цирроза печени, но также встречается при раковых заболеваниях, острой сердечной недостаточности и даже при туберкулезе. Анализ перитонеальной жидкости проводится для определения причины ее наличия и обнаружения или исключения перитонита. Высокая концентрация нейтрофилов обычно указывает на наличие инфекции, в то время как кровянистый асцит чаще всего является следствием опухолевой инвазии.

Перикардиальная жидкость

Перикардиальный выпот представляет собой аномальное скопление жидкости в перикардиальной полости, объем которой в нормальном состоянии не превышает 20–50 мл. Перикардиальный выпот может быть следствием перикардита, вирусных инфекций, воспалительных нарушений, почечной недостаточности, хирургической операции сердца и т. д. Что касается других серозных жидкостей организма (плевральная жидкость, перитонеальная жидкость), то их анализ в основном служит для определения их этиологии или для выявления или исключения инфекций.

Синовиальная жидкость

Синовиальная жидкость представляет собой прозрачную жидкость организма, которая содержится в суставной полости и снижает трение между суставными хрящами во время движения. При артрите и инфекции объем данной жидкости увеличивается. Подсчет и дифференциация клеток может помочь в выявлении воспалительной или инфекционной природы суставного выпота. Очень высокая концентрация белых клеток крови (возможно более 100 000/мкл) с преобладанием нейтрофилов указывает на наличие инфекции в суставе.

Жидкость, образующаяся при постоянном амбулаторном перитонеальном диализе (ПАПД)

Жидкость, образующаяся при постоянном амбулаторном перитонеальном диализе (ПАПД), не является естественной жидкостью организма, поскольку она не образуется физиологически или вследствие заболевания, а является исключительно следствием лечения заболевания. Процесс ПАПД представляет собой альтернативу гемодиализу для пациентов, страдающих от заболеваний почек. При данном процессе брюшная полость пациента используется в качестве мембраны, через которую жидкости и вещества удаляются из крови посредством осмоса. Данная процедура применяется при распространенных инфекциях брюшной полости. Повышенная концентрация белых клеток крови с высоким содержанием нейтрофилов может указывать на перитонит, в то время как эозинофилия обычно считается вторичным эффектом от использования катетера.

Дугласово или позадиматочное пространство, представляет собой анатомическое пространство, расположенное в задней части малого таза женщины. Оно находится между задней стенкой матки, шейкой, вагинальным задним сводом и передней стенкой прямой кишки. В физиологических условиях говорится, что Дугласово пространство свободно, т. е. не содержит жидкости или ткани.

Наличие следов жидкости в позадиматочном пространстве может указывать на овуляцию, и в этом случае нет причин для беспокойства. Больший объем жидкости можно визуализировать во время трансвагинального УЗИ. Всегда нужно определить характер обнаруженного секрета - кровавая жидкость, перитонеальная жидкость (асцит), гной и т. д. Для этой цели часто проводится диагностическая пункция позадиматочного пространства, чтобы получить материал для исследования и определить вероятную причину накопления жидкости.

Причины наличия жидкости в Дугласовом пространстве, как правило, - это заболевания половых органов, но не всегда. Если жидкость в позадиматочном пространстве появляется в определенные дни менструального цикла, нет никаких причин для беспокойства.

У сексуально зрелых женщин и девочек регулярно - особенно сразу после овуляции (как раз после половины цикла) - есть небольшое количество свободной жидкости. Однако, если обнаруживается присутствие жидкости в первой фазе цикла или в конце второго, и в больших количествах, то можно заподозрить патологию придатков матки или брюшной полости.

Жидкость в позадиматочном пространстве причины

Самыми частыми причинами появления жидкости за маткой являются заболевания:

• разрыв кисты яичников;
• водянка яичника;
• эндометриоз;
• разрыв внематочной беременности;
• аднексит;
• рак яичников;
• перитонит;
• энтерит;
• цирроз печени;
• гиперстимуляция яичников (после гормональной стимуляции).

В зависимости от характера жидкости за маткой:

Наличие кровавой жидкости позади матки может быть результатом:

• кровотечения в брюшную полость из органов малого таза,
• разрыв внематочной беременности,
• разрыв кист яичников,
• наличие фокусов перитонеального эндометриоза.

Большое количество асцитной (перитонеальной) жидкости может быть из-за:

• женский генитальный рак (рак яичника, фаллопиевой трубы, шейки матки),
• цирроз печени,
• недостаточности кровообращения.

Наличие гнойной жидкости может говорить про:

• воспаление малого таза (например, придатков);
• или брюшной полости (например, перитонит, воспаление кишечника).

Заболевания, при которых есть свободная жидкость в пространстве Дугласа

Разрыв кисты яичников

Киста яичника - это патологическое пространство внутри яичника, окруженное стенкой. Есть несколько типов кист яичников: простые, заполненные серозной жидкостью, кисты дермоидные и эндометриальные (шоколадные кисты, которые образуются в процессе эндометриоза). Иногда киста может образоваться на месте не разорвавшегося фолликула во время овуляции - этот тип кисты, как правило, спонтанно поглощается. К сожалению, также может случиться, что киста в яичнике указывает на наличие рака. Кисты могут иногда не давать никаких симптомов и обнаруживаются случайно во время обычного абдоминального УЗИ. Иногда, однако, их присутствие может вызвать различные недомогания:

• нарушения менструального цикла,
• нерегулярное кровотечение, не связанное с месячным циклом,
• боль в животе,
• боль в области яичника, где расположена киста.

Бывает, что киста разрывается, тогда женщина чувствует сильную боль, а во время абдоминального УЗИ находят наличие жидкости в позадиматочном пространстве. Лечение кист, если они не дают никаких симптомов, может состоять только в их систематическом наблюдении. Однако, если кисты вызывают проблемы или увеличиваются, они требуют удаления (по лапароскопическому или традиционному методу в зависимости от типа кисты).

Разрыв внематочной (эктопической) беременности

Когда происходит эктопическая беременность? Внематочная беременность возникает, когда оплодотворенные яйцеклетки имплантируются в другом месте, чем тело матки. Частота эктопической беременности оценивается примерно в 1% от всех беременностей. Наиболее распространенным местом эктопической беременности является фаллопиева труба. Фактически, эмбрион может имплантироваться почти везде: в шейке матки, яичнике или брюшной полости. Самой опасной для здоровья и жизни женщины является брюшная или цервикальная беременность, но, к счастью, они происходят очень редко.

Каковы симптомы внематочной беременности? В ходе внематочной беременности могут возникать аномальные выделения и кровотечения, кроме того, присутствуют боли в животе, иногда трудности с дефекацией. В ситуации, когда эктопическая беременность разрывается, появляется острая боль в животе, в то время как ультразвуковое исследование выявит жидкость в Дугласовом пространстве. Лечение внематочной беременности всегда хирургическое.

Воспаление придатков

Для аднексита, характерен так называемый восходящий путь - вагинальные микробы попадают в высшие органы женской репродуктивной системы. До недавнего времени наиболее распространенным возбудителем, вызывающим воспаление придатков, был гонококк. В настоящее время, из-за значительного снижения заболеваемости гонореей, бактерия уже не самый распространенный организм. В этиологические факторы аднексита также включены следующие патогены:

• хламидиоз;
• микоплазма гениталис и другие микоплазмы;
• кишечная палочка;
• стрептококки группы В и другие стрептококки;
• Gardnerella гарднерелла вагиналис.

Наибольший удельный вес в формировании инфекции, приводящей к воспалению придатков имеют хламидиоз и гонококки.

Какие симптомы вызывает аднексит? Прежде всего, может наблюдаться боль в нижней части живота, обычно боль является двусторонней. Кроме того, может присутствовать диспареуния (боль во время полового акта), а также аномальные выделения из половых путей, связанные с воспалением шейки матки или влагалища. Бывает ненормальное кровотечение - межменструальные кровотечения или очень тяжелое менструальное кровотечение и лихорадка выше 38 С. Ультразвуковое обследование может выявить наличие жидкости позади матки. Лечение воспаления придатков заключается в применении антибиотиков и симптоматической терапии.

Рак яичников

Этот рак длительное время не вызывает никаких симптомов, наличие симптомов, таких как боль внизу живота, увеличение брюшной полости или вагинальное кровотечение, к сожалению, свидетельствуют о тяжести рака.

Перитонит

Наличие гнойной жидкости в позадиматочном пространстве может указывать на наличие перитонита и требует уточнения диагноза и обследования желудочно-кишечного тракта и мочевыводящих путей.

Симптомы жидкости в Дугласовом пространстве

Симптомы зависят от причины накопления жидкости. Например, в случае разрыва кисты яичника могут появиться боли в брюшной полости, которые периодически становятся острыми и режущими, тошнота и рвота, диарея, потеря аппетита. При разрыве внематочной беременности - кровянистые выделения и кровотечение из влагалища, боль в нижней части живота, боли в яичниках, а иногда и чувство неполного опорожнения кишечника.

При воспалении придатков возникает внезапная схваткообразная боль с обеих сторон живота, усиливающаяся во время полового акта. Иногда она отдает в паховую область и бедра. Сопровождается слабостью, лихорадкой или лихорадочным состоянием.

Диагностическая пункция через задний свод влагалища

Пункция позадиматочного пространства - это простой инвазивный метод, особенно полезный для диагностики кровотечения в брюшной полости органов малого таза и для обнаружения нарушенной внематочной беременности. Процедура проводится под общей анестезией в больничных условиях. Пункция Дугласова кармана выполняется через влагалище с использованием 20 мл шприца и иглы с длиной мин. 20 см и диаметром 1,5 мм. Вставив зеркало, гинеколог вводит иглу через задний свод влагалища, а затем аспирирует ее содержимое в шприц.

Иногда пункция проводится под ультразвуковым контролем, чтобы избежать риска прокалывания крупных тазовых сосудов. После того, как игла вынимается, содержимое шприца тщательно осматривается. Полученный материал также может быть передан для цитологического или бактериологического исследования. Обнаружение фрагментов сгустков или кровянистой жидкости может говорить о кровотечении в брюшную полость из-за нарушенной внематочной беременности. Такое состояние, с наличием клинических, лабораторных и ультразвуковых симптомов, является показанием к операции по удалению нарушенной внематочной беременности, чаще всего с использованием лапароскопического метода.

Недостаток содержимого, полученный при пункции позадиматочного углубления, не исключает кровотечения в перитонеальную полость или существование внематочной беременности, особенно когда симптомы указывают на раздражение брюшины. Кровотечение может быть минимальным или могут быть послевоспалительные спайки, которые препятствуют сбору материала для исследования. Наличие кровавой жидкости также может свидетельствовать о эндометриозе. Кровавое содержимое Дугласовой полости может быть инфицировано (суперинфекции), ухудшая состояние пациента, страдающего эндометриозом. Лечение включает аспирирование гемолизированной крови из Дугласова кармана и лапароскопическое удаление эндометриоза.

Цитологическое исследование жидкости

Обнаружение повышенного количества перитонеальной жидкости может быть достаточной причиной для сохранения онкологической активности. Асцитную жидкость, собранную во время прокола позадиматочной полости следует направлять на цитологическое исследование для подтверждения или исключения опухоли. Обнаружение присутствия раковых клеток в жидкости из брюшной полости дает ценную информацию для врача, поскольку это может свидетельствовать о появлении первичного злокачественного новообразования женских половых органов.

У женщин, которые ранее болели раком и были подвергнуты хирургическому лечению, этот симптом может указывать на возобновление рака. Как правило, наличие опухолевых клеток в перитонеальной жидкости связано с большим распространением рака женских половых органов, что является неблагоприятным прогностическим фактором у этих пациентов. Следует отметить, что цитологическое исследование жидкости из перитонеальной полости является лишь вспомогательным методом при выявлении злокачественных опухолей яичника, фаллопиевой трубы, шейки матки.

Цитологическое исследование жидкого осадка также может выявить повышенное количество воспалительных клеток, которые появляются при различных воспалениях органов малого таза. Наконец, повышенное количество перитонеальной жидкости является результатом других заболеваний, например, цирроза печени или недостаточности кровообращения.

Когда следует обратиться к врачу?

Пациенты должны немедленно обратиться к врачу если в дополнение к увеличению количества жидкости в полости Дугласа имеются следующие симптомы:

• боль в животе,
• болезненное половое сношение,
• кровотечение из половых путей, не связанное с менструациями, контактное кровотечение,
• тошнота, рвота,
• быстрое увеличение окружности брюшной полости,
• лихорадка, озноб,
• потеря веса.

Лечение

Лечение зависит от причин жидкости в позадиматочном пространстве. Например, в случае разрыва кисты яичника обычно необходима операция, чтобы удалить кисту. В случае разрыва внематочной беременности необходимо удалить ее лапароскопически.